MMLV逆转录酶

特别提示：包括MMLV逆转录酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：MMLV逆转录酶
英文名称：MMLV Reverse Transcriptase

产品货号：MMLV逆转录酶
产品规格：10000U

该酶是突变型的MMLV逆转录DNA聚合酶，从表达莫洛尼氏鼠白血病病毒reverse transcriptase基因(pol基因)的E.coli细胞中分离纯化而得，由一个分子量为76.1KDa的单亚基组成，可催化以单链DNA、RNA或DNA:RNA杂交链为模板的互补DNA链的聚合反应。跟野生型相比,它没有RNase H活性。

产品特点;
1．延伸性能好，可合成长达12.5 Kb的fμLl-length cDNA。
2．最佳反应温度为42℃，但在50℃时仍然有活性，70℃10分钟能使其失活。
3．能以Cy3-，Cy5-，rhodamine-，aminoallyl-，fluorescein等标记的nucleotides 为底物。
4．可用于first strand cDNA 合成，second strand cDNA 合成，DNA labeling，RNA primer extension等。
5．与PCR 兼容，RT产物可以用于PCR和real-time PCR。
6．能被金属螯合剂，无机磷酸，焦磷酸和多胺抑制。
7．没有RNase H活性。

产品组成：

成分	规格
MMLV逆转录酶(200U/μL)	50μl
5×RT Buffer	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有限期一年。

使用方法：

一、合成PCR用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
总RNA 或poly(A)mRNA 或专一的RNA	100-500 ng 10-500 ng 0.01pg-500ng
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 15-20pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以直接作为PCR模板使用，不需要纯化。

二、合成建文库用的1st-strand cDNA
1．按下表配制RT反应体系:

加入物	加入量
poly(A)mRNA 或专一的RNA	1ug 0.5-1ug
注：RNA样品不能有基因组DNA污染。
Oligo(dT)18(0.5ug/μL) 或随机引物(0.2ug/μL) 或RNA模板专一性引物	1μL 1μL 100pmol
注：随机引物于RNA模板的比例跟最后得到的cDNA的平均长度成反比
RNase-free水	补水到12μL

2．70℃保温5分钟后立即冰浴。
3．严格按下表顺序加入各成分：

5×RT Buffer	4μL
RNase Inhibitor(20U/μL)	1μL
dNTP(10mM each)	2μL

4．37℃保温5分钟。对富含二级结构的高GC RNA模板，可以改成45℃保温5分钟。如果使用随机引物，则保温温度只能是25℃(5分钟)。
5．加入1μL(200 U)MMLV逆转录酶，反应终体积为20μL。
6．42℃保温60分钟(但如果使用随机引物，需要先25℃保温10分钟，然后再转移到42℃保温60分钟)。
7．70℃保温10分钟以终止反应，放置在冰上待用。合成的cDNA可以用于第二链cDNA的合成或放置在-20℃。

除了MMLV逆转录酶,，我公司还供应以下相关产品：



名称：无机焦磷酸酶(PPase)(酵母)
货号：BTN130658
规格：10U
无机焦磷酸酶催化无机焦磷酸盐水解生成正磷*(代"酸")盐，转录过程中可提高RNA的产量，其反应原理如下：


产品组成：

组份	规格
无机焦磷酸酶(100U/mL)	100μL
10×Buffer	1mL
使用手册	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1单位指标准反应条件下，[0.5ml反应体系中，100mM Tricine(pH7.2),2mM MgCl2和2mM PPi，于25℃反应10分钟]每分钟催化从无机焦磷酸盐生成1μmol磷酸盐的酶量。


名称：AlwNI限制性内切酶
货号：SV0043
规格：2500U|500U|250U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dcm甲基化敏感。
注意事项:
如下条件可能出现星号活性:低离子强度、高酶浓度、甘油浓度＞5% 或 pH 值＞8.0。

名称：BspQI限制性内切酶
货号：SV0218
规格：2500U|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 100%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 100%
特性
重组酶、省时酶。
反应条件
BalbBuffer 3.1，50℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
10,000units/ml。
37℃ 时活性
10%。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项
甘油浓度＞5% 条件下可能出现星号活性。

名称：KpnI-HF限制性内切酶
货号：SV0451
规格：20KU|20KU|4KU|2KU
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 25%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、基因工程改造酶、省时酶、高保真酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
浓度:
20,000和100,000units/ml。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
注意事项:
Kpnl是Acc65l的不完全同裂酶。Kpnl 产生一个 4 碱基的 3´突出端，而 Acc65l 产生一个 4 碱基的 5´突出端。

名称：RsaI限制性内切酶
货号：SV0639
规格：5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 25%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: <10%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。

名称：SmlI限制性内切酶
货号：SV0704
规格：2500U|500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 25%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，55℃。
浓度:
10,000units/ml。
37℃ 时活性:
10%。
甲基化敏感性:
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。

名称：I-SceI归位内切酶
货号：SV0815
规格：2500U|500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液，37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
5,000units/ml。
注意事项:
归位内切酶没有严格定义的识别序列。

名称：BAL-31 核酸酶
货号：SV1074
规格：250U|50U
特性:
从两端逐步对双链 DNA 进行切割
限制性酶切图谱的构建
概述:
BAL-31 核酸外切酶降解双链 DNA 的 3´ 和 5´ 末端，不切割分子内部。该酶同时还是高度特异性的单链核酸内切酶，在切刻、缺口、双链 DNA 单链区和双链 RNA 的单链区进行切割。
来源:
纯化自埃氏交替单胞菌（Alteromonas espejiana）BAL-31 培养物，该培养物含有本酶“快”和“慢”两种形式。
反应条件:
1X 核酸酶 BAL-31 反应缓冲液
[600 mM NaCl，20 mM Tris-HCl（pH 8.0 @ 25℃），1 mM EDTA，12 mM MgCl2，12 mM CaCl2]，30℃ 温育。
热失活:65℃ 加热 10 分钟。
质保声明:
BAL-31 核酸酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位指在 50 μl 反应体系，1X 核酸酶 BAL-31 反应缓冲液，30℃ 条件下，10 分钟从线性双链 φX174 DNA（40 μg/ml）的两端各切下 200 个碱基对所需要的酶量。
浓度:
1,000 units/ml。
注意事项:
该核酸外切酶的双链产物是平齐末端和粘性末端的混合物。尽管要达到最佳连接效率需要用合适的聚合酶修复粘性末端，但该混合物仍可以直接进行克隆。
如果需要，可以在使用前用反应缓冲液稀释该酶。

名称：Cre重组酶
货号：JN0078
规格：25U×5
  Cre重组酶是细菌噬菌体P1的I型拓扑异构酶,催化loxP位点间的DNA进行位点特异性重组。本酶无需能量辅助因子，Cre-介导的重组很快在底物与反应产物之间达到平衡。loxP识别元件是一34bp序列，其两端是两个13 bp的反向重复序列，中间是起定向作用的8 bp间隔区。重组产物根据loxP位点的位置和相对方向而不同，两个含单loxP位点的DNA将被融合。两个正向重复loxP位点间的DNA将以环状形式切割，而两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。
  本制品是把编码细菌噬菌体P1 Cre蛋白的质粒在大肠杆菌中进行表达后，经多次纯化分离而得到的。

产品用途：
1、两个loxP位点之间DNA的切割；
2、含loxP位点DNA分子的融合；
3、loxP位点之间DNA序列的翻转。

使用建议：建议进行琼脂糖凝胶电泳前，将Cre重组酶反应混合物于70℃温育10分钟。

质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：在50 μl反应体系中，37℃ 30分钟条件下，使0.25 μg的pLox2+对照DNA产生最大位点特异性重 组所需要的酶量定义为一个单位。最大重组可以 通过琼脂糖凝胶电泳分析或通过反应物转化后行 氨苄抗性平板筛选。

热失活：70℃，10分钟。