慢病毒报告基因阳性对照

特别提示：包括慢病毒报告基因阳性对照在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：慢病毒报告基因阳性对照
英文名称：Lentivirus Luciferase Reporter positive control

产品货号：慢病毒报告基因阳性对照
产品规格：50μl×4管；2×10e7TU/ml

pGMLV-CMV-Lu慢病毒质粒是以CMV作为启动子，启动Luciferase在细胞内的表达，可作为萤火虫荧光素酶（Firefly Luciferase）报告基因的阳性对照使用，通过对质粒上可以被预测出的转录因子结合位点全部进行适当的突变处理，使质粒对转录因子的非特异结合降到了最低。采用慢病毒作为报告基因的优点在于它能够感染多种难感染的细胞，比如原代细胞，干细胞，神经元细胞等。同时，慢病毒可以将携带的外源基因插入细胞的基因组中，进行长时间的表达。

质粒图谱



注意事项
1）病毒操作时最好使用生物安全柜，如使用普通超净工作台操作病毒，请不要打开风机。
2）病毒操作时请穿实验服，带口罩和乳胶手套。
3）操作病毒时必须特别小心，不要产生气雾或飞溅。如操作时超净台有病毒污染，立即用10%次氯酸*(代"钠")溶液搽拭干净。接触过病毒的枪头、离心管和培养板等需用10%次氯酸*(代"钠")溶液浸泡1h以上后弃去。
4）用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜试验台前，用70%乙醇清理实验台。
5）病毒操作完成后，用肥皂清洗双手。
6）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作

储存条件：-80℃。

除了慢病毒报告基因阳性对照,，我公司还供应以下相关产品：



名称：萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒
货号：SY0058
规格：100T|500T|1000T
报告基因检测是现代分子生物学研究领域中分析结构基因旁侧区域潜在的顺式元件（如启动子、增强子和沉默子等）和反式作用因子相互作用关系的一种重要工具。本萤火虫荧光素酶报告基因检测试剂盒（Firefly Luciferase Reporter Gene Aassy Kit），是通过萤火虫荧光素（luciferin）为底物来检测萤火虫荧光素酶。荧光素酶在 Mg2+和 O2 参与下催化荧光素氧化成oxyluciferin，在荧光素的氧化过程中，发出生物荧光（bioluminomescence），然后通过化学发光仪或液闪测定仪测定生物荧光。

产品特点
1）简便，快捷。
2）灵敏度高，可检测10-20 mol的荧光素酶。
3）安全，非放射性。
4）酶的浓度线性范围可达8个数量级。

产品组份：

组分	100T	500T	1000T
细胞裂解液	60ml	60ml×5	60ml×10
萤火虫荧光素酶检测试剂	10ml	10ml×5	10ml×10

保存：未拆封试剂盒-20℃避光保存，有效期为 6 个月。-70℃避光保存，有效期为一年。试剂盒内萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）避光保存，不能反复冻融。

实验步骤

1. 细胞裂解：
1）将转入报告基因的细胞中的培养基移除，加PBS轻轻洗涤。按如下方案加入细胞裂解液（Cell lysis buffer），然后将培养板放在微型振荡器上室温振荡15min，充分裂解细胞。

细胞培养板	96孔板	48孔板	24孔板	12孔板	6孔板
细胞裂解液（µl/孔）	30µl	60µl	120µl	250µl	500µl

【注】：裂解产物可室温保存6h，4℃保存16h，-70℃可长期存放。（裂解产物不能多次反复冻融）。
2）将充分裂解后的裂解产物，10000-15000rpm离心3-5min。离心后将上清液移入新的EP管中进行后续检测。
2.荧光素酶检测：
1）按照仪器说明书要求将荧光测定仪打开，设定参数，测定时间为10s，测定间隔为2s。
2）将样品按照20～100µl的体积（如果样品量足够，请加入100µl）加入测量管中（保持每次样品的加样量一致），另外加入萤火虫荧光素酶检测试剂（Firefly luciferase assay reagent）混匀 2-3 次（不能漩涡混匀），充分混匀后测定RLU（Relative light unit），同时设置细胞裂解液（Cell lysis buffer）为对照孔。

注意事项
1）温度会对酶的活性会产生影响，因此所有试剂应放置室温后再使用。
2）如用单管荧光测定仪测定，每个样品与测定试剂混合后到测定前的时间应保持一致。
3）萤火虫荧光素酶催化的生物发光的最强发光波长为 560nm。
4）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。