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- 百奥莱博
- WE0309-HSU
- 北京
- 2025年07月12日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
795
- 英文名：
Soluble TMB Kit(20×)
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
2～8℃
特别提示：包括TMB底物显色试剂盒(可溶型，20×)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：TMB底物显色试剂盒(可溶型，20×)
英文名称：Soluble TMB Kit(20×)
产品规格：100ml
TMB(3", 3", 5", 5", -四甲基联*(代"*")*(代"胺"))是辣根过氧化物酶(HRP)显色底物，是目前HRP系统ELISA实验的常用显色试剂。TMB显色底物工作液在HRP的催化下，形成蓝色的阳离子产物，在370 nm和652 nm处有主要吸收峰。加酸终止反应后，蓝色转变为黄色，可以在450 nm波长下测定。本试剂盒使用方便，灵敏度高，效果稳定，颜色产物为可溶性，适用于ELISA，不推荐用于IHC实验。
试剂盒组成：
| 组份 | 100ml |
| 20×T MB-A | 5ml |
| 1×TMB-B | 2×50ml |
注意事项：
1、显色工作液应即用即配，放置超过10分钟会影响显色效果。
2、TMB颜色底物显色后，随着时间的延长，颜色会逐渐消退，因此显色并终止反应后应尽快读值，否则会影响检测的准确性。
3、以96孔酶标板每孔用量100μl显色工作液计算，5ml 20×TMB Kit 可完成1000孔样品的检测。
4、本产品仅限于科研，不能用于人体实验或人体治疗。
操作步骤：
1、TMB显色工作液配制：
根据实验需用量，将20×TMB-A和1×TMB-B以1：19的比例均匀混合，即配制成为TMB显色工作液。
2、显色：
1)经HRP标记物孵育并充分洗涤后，酶标板每孔中加100μl TMB显色工作液。
2)室温避光孵育25-30分钟，反应产物呈蓝色。
3)每孔加50μl 0.5M H2SO4 终止显色，此时蓝色产物变为亮黄色。
4)将酶标板置于酶标仪中，450 nm波长下读取数据。
储存条件：2～8℃
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文献和实验20×SSC溶液 【配制方法】 在800ml水中溶解175.3g NaCl和88.2g柠檬酸钠，加入数滴10mol/l NaOH溶液调节 pH值至7.0，加水定容至1L，分装后高压灭菌。 (责任编辑：大汉昆仑王)
。6）滴加正常山羊血清封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。7）滴加 Ⅰ 抗,室温1小时或者4℃过夜或者37℃1小时（4℃过夜后在37℃复温45分钟）。8）PBS洗三次每次2分钟。9）滴加生物素化二抗,20℃～37℃ 20 分钟。10）PBC 洗 3 次每次 2 分钟。11）滴加试剂SABC，20℃～37℃ 20 分钟。12）PBS 洗 4 次每次 5 分钟。13）DAB 显色：DAB 显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。14）蒸馏水洗。苏木素复染 2 分钟、盐酸酒精分化。15）脱水、透明
梯度（两个孔）取其平均值减去空白后制作标准曲线得到曲线公式。测得的样品的 OD 值（三个孔）取其平均值按标准曲线的公式运算得到蛋白浓度，按 50 μg/上样孔的标准来计算上样量，算法为：上样量= 50/蛋白浓度。注：所有得到的 OD 值必须减去背景（标曲中空白孔的 OD 值）后再计算。 样品处理： 蛋白样品：5×SDS 上样缓冲液按照 4：1 比例混合沸水浴 10 min 左右。浓度过高的样品可用 PBS 稀释后再煮样。样品煮好后 -20 ℃ 保存待用（可保存半年），样品长期保存须置于 -70
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