中pH缓冲液套装

特别提示：包括中pH缓冲液套装在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：中pH缓冲液套装
英文名称：Medium pH Buffer Set
产品货号：BTN100829
产品规格：30次

Native-PAGE，非变性聚*烯酰胺凝胶电泳是目前电泳法分离非变性蛋白质的主要方法，实验过程杜绝变性剂接触目的蛋白质，常用于同工酶的鉴定和提纯。本产品可快速制备分离胶，不含SDS，并确保配制分离胶的精确pH值。

产品组成：

成份	规格(30次*)
4×浓缩胶配胶液(pH5.5)	100ml
4×分离胶配胶液(pH7.5)	200ml
中pH电泳液(pH7.0)	10L(干粉)
5×中pH上样液	1ml
使用手册	1份

*注：1次是指的一次mini-Gel电泳

储存条件：常温运输及保存(5×中pH上样液需要-20℃保存)，有效期为一年。

除了中pH缓冲液套装,，我公司还供应以下相关产品：



名称：Western及IP细胞裂解液
货号：YT038
规格：100ml
本品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036，YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。


名称：小分子蛋白电泳试剂盒
货号：RFT078
规格：10次
本试剂盒含有小分子蛋白电泳(多肽电泳)全套试剂，可以用来检测1-20kd的多肽大小。本试剂盒可配制至少10块常规大小的PAGE胶(8×10cm)。

试剂盒特点：
1 适用范围广：2×多肽电泳缓冲液和2×PAA溶液中不含有SDS，适用于多肽的变性和非变性电泳。
2 分辨率高：凝胶缓冲液独特配方，可以有效分离1-5kD多肽。
3 稳定性高：凝胶缓冲液pH为中性，存放时间长。
4 使用方便：配制凝胶时只需1:1混合2×凝胶缓冲液和2×PAA溶液，加上APS和TEMED即可配制凝胶。

试剂盒组成：

组份	规格	贮存
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液	15 ml	4℃
2×多肽电泳分离胶缓冲液	30 ml	4℃
2×PAA溶液 超低浓缩胶用	15 ml	4℃
2×PAA溶液 超低分离胶用	30 ml	4℃
10% APS(干粉)	5 ml	常温
TEMED	0.5 ml	常温
10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)	500 ml(干粉)	常温
2×Tricine 上样缓冲液(含还原剂)	1 ml	-20℃
QuickLan蛋白染色液	500 ml	常温

使用方法：

一、10% APS配制：

10% APS配制-5 ml：将APS干粉溶于5 ml灭菌水中，彻底溶解后分装，1 ml/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10%APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20度保存的10% APS。

二、制胶：

I 配制分离胶
1、按照表一将不同体积的成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。

表一：(一块1 mm mini胶用量)*

	分离胶	浓缩胶
	18％T /5 ml	5％T /2 ml
2×多肽电泳浓缩胶缓冲液	/	1 ml
2×多肽电泳分离胶缓冲液	2.5 ml	/
2×PAA溶液 超低浓缩胶用	/	1 ml
2×PAA溶液 超低分离胶用	2.5 ml	/
10％APS	45-60μl**	20-30μl
TEMED	5μl	2μl

注：
* 如非必须，不要使用厚度1.5mm的凝胶，尽量使用厚度0.75m和1mm的凝胶，这样会减少电泳后染色和脱色的时间。
** 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据表二的标准条件调节催化剂的加入量。

表二：超低凝胶制备凝固时间表

环境温度	20℃
	分离胶配制	浓缩胶配制
分离胶配制量	5 ml	-
浓缩胶配制量	-	2 ml
10%APS	50μl	20μl
TEMED	5μl	2μl
凝固时间	5-10 分钟	20-30 分钟

2、在凝胶模具中迅速灌入适量分离胶溶液，然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-3 cm的无水乙醇层，使凝胶表面保持平整。
3、静置5-10分钟，待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面表示凝胶已聚合。

II 配制浓缩胶
去除覆盖在分离胶上的水层，用滤纸将残留的水吸去。
1、按照表一将不同成分加入到小烧杯或离心管中混合；立即混匀5-10秒，以使溶液充分混匀。
2、将梳子插入凝胶内，避免产生气泡。
3、静置20-30分钟待凝胶聚合

三. 电泳：

10×Tricine-Tris-SDS缓冲液配制：
将10×Tricine-Tris-SDS缓冲液(10×TTS)粉末(Cat No：CB010P)置于一干净的一升烧杯中，加入500ml超纯水，彻底搅拌混匀，不要调节pH，即配成500ml的10×TTS缓冲液。

表三：1×TTS缓冲液配制

	1×TTS配制量 500 ml	1×TTS配制量 1000 ml
10×TTS	50ml	100ml
超纯水	450 ml	900 ml

注：伯乐Mini III电泳槽一次电泳使用500ml 1×TTS缓冲液。

将电泳槽的内槽加满1×TTS缓冲液，轻柔拔出梳子，用1ml移液器将梳孔吹洗干净，将Marker或蛋白样品(已经过2×Tricine上样缓冲液[Cat No：TP050]处理)加入点样孔，稳压电泳(表四)，至蓝色指示前沿至分离胶下沿位置时即可停止电泳。整个电泳过程大约需要2.5-3个小时。

表四 多肽电泳条件

恒电压	150V
起始电流	60-75mA/板胶
结束电流	15-25mA/板胶
电泳时间	2.5-3小时

四、染色(使用组分9-QuickLan蛋白染色液)：

用前必读：
1、使用前如发现瓶中有少许沉淀，请混匀后使用。
2、以下“使用方法”是针对0.75mm和1.0 mm厚度，10×10cm凝胶染色程序。

使用方法：
1、将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量染色液(以刚刚覆盖过胶面为适)，条带1-2分钟即可见。
2、摇床上常温摇动10-15分钟。
3、观察结果。

注意事项：
1、使用方法中的各种参数仅针对面积8×10cm或10×10cm，厚度0.75mm和1mm的凝胶，如果使用更大面积或更厚的凝胶，请加入更多的染色液并延长染色的时间。
2、常规染色所需的漂洗，固定，脱色步骤都无必要。
3、本染色液可以重复利用1-2次，敏感性会有轻微下降，请延长染色时间。
4、本染色液有轻微腐蚀性，请带手套操作。使用后，请盖好瓶盖，常温密封保存。

储存条件：4℃，有效期一年。