N端HA标签融合蛋白质粒

特别提示：包括N端HA标签融合蛋白质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：N端HA标签融合蛋白质粒
英文名称：N-HA plasmid（with CMV promoter）

产品货号：N端HA标签融合蛋白质粒
产品规格：1μg

本质粒是用于在哺乳动物细胞中表达N端和HA tag(HA标签)融合的目的蛋白的表达质粒。含有CMV启动子可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达；在多克隆位点的5"端含有一个可以编码HA标签的序列，因此可以表达出含有HA标签的融合蛋白，可以方便地使用抗HA的抗体来识别目的蛋白，有利于目的蛋白检测和分离纯化。质粒为卡那霉素抗性。转染细胞后，可使用G418筛选稳定表达目的蛋白的细胞株。

本质粒质粒的主要信息如下：

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	1-602
T3 promoter and T3 primer binding site	620-639
HA tag	679-705
multiple cloning site	708-781
T7 promoter and T7 primer binding site	824-845
SV40 polyA signal	857-1240
f1 origin of ss-DNA replication	1378-1684
bla promoter	1709-1833
SV40 promoter	1853-2191
neomycin/kanamycin resistance	ORF 2226-3017
HSV-thymidine kinase(TK)polyA signal	3018-3476
pUC origin	3605-4272

本质粒的图谱如下：


使用说明：
1. 首次使用时请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
2. 本质粒在其多克隆位点适当酶切后可以插入待表达的目的基因，需注意插入基因片段和tag之间的读码框要一致，即需要避免发生移码突变。构建的质粒可以用常规方法转染细胞。

储存条件：-20℃。

除了N端HA标签融合蛋白质粒,，我公司还供应以下相关产品：



名称：大肠杆菌SURE化学感受态细胞
货号：BTN90208
规格：0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌SURE菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。该菌株主要是用来克隆不稳定DNA结构如重复序列、二级结构(如Z-DNA)等。

菌株基因型：

基因型	表现型
endA1	核酸内切酶I缺失
gyr A96	具有萘啶酮酸抗性
lac	不能利用乳糖
rec B & rec J	DNA重组修复功能缺失
relA1	允许在无蛋白质合成时有RNA合成
sbcC	允许基本重组
supE44	抑制琥珀突变，为某些噬菌体必需
thi-1	需要硫氨才能生长
umuC::Tn5	卡那霉素抗性
uvr C	不能切除变异碱基
mcrA△(mcr CB-hsdSMR-mrr)171	DNA甲基化系统缺失
F’[ lacIlac Z△M15 Tn10 proAB+]	提供α-互补所需的ω片断，具有四环素抗性

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以50μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击45秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含相应抗生素的SOC或LB固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1. 涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2. 新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3. 涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。