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- 百奥莱博
- MQ0018-FZT
- 北京
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
728
- 英文名：
DH10Bac Chemically Competent Cell
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件：
-80℃
- 规格：
10×100μl/50×100μl
特别提示：包括DH10Bac化学感受态细胞在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：DH10Bac化学感受态细胞
英文名称：DH10Bac Chemically Competent Cell
产品规格：10×100μl/50×100μl
DH10Bac感受态主要用于生产重组杆状病毒分子(Bac-to-Bac杆状病毒表达系统)。
DH10Bac菌株中含有父本杆粒bMON14272、辅助质粒pMON7124：父本杆粒bMON14272
包含mini-F复制子，卡那抗性基因，attTn7位点和lacZα互补因子；辅助质粒pMON7124含有tnsABCD区(tnsABCD region supplies the transposition proteins required for insertion of the mini-Tn7 from the donor plasmid into its target site on the parent bacmid)，具有四环素抗性，在细胞扩增过程中丢失，但可提高供体质粒pFastBac转化后的基因转座效率。
mcrA、mcrBC 及 mrr突变使DH10Bac菌株适合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA(Therefore，genomic DNA，both prokaryotic and eukaryotic，can be cloned efficiently in DH10Bac)。
recA1和endA1的突变有利于插入DNA的稳定和高纯度质粒DNA的提取。
φ80dlacZ∆M15的存在使DH10Bac可用于蓝白斑筛选，DH10Bac感受态细胞经特殊工艺制作，经pUC19质粒检测转化效率>108cfu/μg。
保存条件：-80℃
基因型：
F-mcrA(mrr-hsdRMS-mcrBC)80lacZM15 lacX74 recA1 endA1 araD139 ∆(ara,leu)7697 galU g alK λ-rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124
操作说明：
1.DH10Bac感受态细胞放置冰中融化(或放手心或室温片刻，待菌体处于冰水混合状态时迅速插入冰中)，加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手拨打EP管底轻轻混匀，冰上静置25分钟。
2.42℃水浴热激45秒，迅速放回冰上并静置2分钟，晃动会降低转化效率。
3.向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养液(2YT或LB)，混匀后37℃，200 rpm复苏60分钟。
4.5000rpm离心一分钟收菌，留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作，将平板放37℃培养至少13h。
注意事项：
1.感受态细胞最好在冰上融化。
2.混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3.转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少最终用于涂板的菌量。
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文献和实验样（比如 GeneArt EX 超长版就建议用 DH10B 电转感受态细胞）。市面上有多种为满足不同需求而优化条件的商品化组装克隆试剂盒，可以根据自己的需求选出最合适自己需要的——选对合适的 Kit ，每天都是好心情，实验高歌猛进充满成就感；选不合适就只能天天 re-search 了——反反复复来来回回(re-)地摸索(search)尝试，挺折磨的。选择kit时一般留意几个参数：插入片段长度，单次反应可插入片段数量，同源序列长度——即合成引物时要求添加的载体同源序列长度，反应时间，当然还有克隆效率（几个领先品牌的产品
系列）：高拷贝会导致大片段质粒复制压力大，易丢失或断裂，优先用低拷贝载体（如 pACYC184，拷贝数 10-15）或大片段专用载体（如 BAC 载体 pBeloBAC11，可容纳 100kb 以上片段，在大肠杆菌中稳定存在）； ④选择合适的连接方法，比如 Gibson 组装（无缝克隆）的方法更适合 10-20kb 大片段的连接，相比传统的 T4 连接的方法，成功率更高，操作更简便； ⑤选择重组缺陷型感受态，提高大质粒的转化效率，如 Stbl3、DH10B 等，此外转化方式也会影响转化
Mutagenesis of Viral BACs With Linear PCR Fragments (ET Recombination)
Principle steps of mutagenesis. (A) Preparation of electrocompetent bacterial cells for mutagenesis. Prior to mutagenesis the plasmid pKD46, encoding the recombination functions, is introduced into DH10B containing the viral BAC. In the next step
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