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- 详细信息
- 文献和实验
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- 库存:
50
- 英文名:
FOXO luciferase reporter plasmid
- 保质期:
长期
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
1μg
特别提示:包括FOXO-Luc荧光素酶报告基因质粒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:FOXO-Luc荧光素酶报告基因质粒
英文名称:FOXO luciferase reporter plasmid
产品货号:FOXO-Luc荧光素酶报告基因质粒
产品规格:1μg
FOXO荧光素酶报告基因(报告基因质粒)(FOXO luciferase reporter plasimd)是用于检测FOXO转录活性水平为目的的报告基因。FOXO转录因子家族包括Foxo1,Foxo4,Foxo3a, Foxo6等,它们主要功能包括调节炎症相关细胞的平衡,通过多种不同的信号转导途径参与细胞周期停滞、细胞凋亡和抗氧化应激等免疫相关调节,还在物质代谢等方面也发挥重要作用。
FOXO报告基因主要用于检测细胞中PI3K/AKT信号通路的活性和FOXO转录因子的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。
pGMFOXO-Lu是我公司改造后的哺乳动物真核表达载体,在其多克隆位点插入了多个FOXO结合位点,可以高灵敏度地检测FOXO的激活水平。同时,对载体中预测出的其它转录因子以外的结合位点进行了适当的突变,增加了质粒的转录因子结合特异性。由于质粒体积减小,使得FOXO报告基因质粒更易于转染。
质粒图谱
注意事项
本质粒未经我公司允许不得用于任何商业用途,也不得移交给订货人实验室以外的任何人或单位。
为了您的健康,实验操作时请穿实验服和带一次性手套。
使用说明
pGMFOXO-Lu可以采用常规转染方法转染哺乳动物细胞。用荧光素酶检测试剂盒或双荧光素酶检测试剂盒进行检测。
储存条件:-20℃。
除了FOXO-Luc荧光素酶报告基因质粒,,我公司还供应以下相关产品:
名称:萤光素酶报告基因检测试剂盒(萤火虫)
货号:YT271
规格:100次|1000次
本试剂盒是一种以萤光素为底物来检测萤火虫萤光素酶活性的试剂盒。
萤火虫萤光素酶是一种分子量约为61kD的蛋白,在ATP、镁离子和氧气存在的条件下,可以催化luciferin氧化成oxyluciferin。在luciferin氧化的过程中,会发出生物萤光。生物萤光可以通过化学发光仪或液闪进行测定仪测定。本试剂盒的检测原理参考下图。
萤火虫萤光素酶的检测原理图。
通过萤光素和萤光素酶这一生物发光体系,可以非常灵敏、高效地检测基因的表达。通常把感兴趣基因的转录调控元件或5’启动子区克隆在luciferase的上游,或把3’-UTR区克隆在luciferase的下游等,构建成报告基因质粒。然后转染细胞,用适当药物等处理细胞后裂解细胞,测定萤光素酶活性。通过萤光素酶活性的高低来判断药物处理等对目的基因的转录调控作用。萤火虫萤光素酶催化luciferin发光的最强发光波长为560nm。
注意事项:
1. 为取得最佳测定效果,在用单管的化学发光仪测定时,样品和测定试剂混合后到测定前的时间应尽量控制在相同时间内,例如30秒内;使用具有化学发光测定功能的多功能荧光酶标仪时,宜先把样品全部加好,然后统一加入萤火虫萤光素酶检测试剂。
2. 由于温度对酶反应有影响,所以测定时样品和试剂均需达到室温后再进行测定。
3. 为保证萤光素酶检测试剂的稳定性,可以采取适当分装后避光保存的方法,以避免反复冻融和长时间暴露于室温。经测试,反复冻融三次,对测定结果无明显影响。
4. 样品和测定试剂混合后,必须等待1-2秒,再进行测定。测定时间通常为10秒,根据情况也可以测定更长或更短时间,但是同一批样品宜使用相同的测定时间。
5. 为避免由于质粒转细胞时效率的差异而带来的误差,可以同时转入海肾萤光素酶的报告基因质粒作为内参,采用百奥莱博的双萤光素酶报告基因检测试剂盒(YT273)进行检测;也可以同时转入β-半乳糖苷酶报告基因质粒作为内参,然后采用百奥莱博的β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(YT274)进行检测。采用本试剂盒中的报告基因细胞裂解液裂解获得的样品可以直接用于β-半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒(YT274)的检测。
储存条件:-20℃,有效期一年。
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文献和实验【求助】用于检测双荧光素酶报告基因的细胞究竟是应该同时转染两种质粒呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?谢谢
lsdcfhyj 向大家请教关于双荧光素酶报告基因检测系统与单荧光素酶报告基因检测系统的问题,两者的区别我基本清楚了,只是我没弄清楚用于检测的细胞究竟是应该同时转染两种质粒(分别含虫荧光素酶报告基因和海肾荧光素酶报告基因)呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?还有一个问题是如果是要转染两种质粒的话,是只需在含虫荧光素酶基因质粒中插入所要检测的调控元件基因,还是两种质粒中的荧光素酶基因前都要插入调控元件?谢谢 msniu
longgyin8341 我想研究细胞在氧化应激损伤过程中核受体NFkB对于下游一些目的基因(如ICAM-1等)转录调控的影响,是不是需要把NFkB在基因组上的特异性结合元件克隆出来,与虫荧光素酶报告基因质粒构建重组质粒,然后转染细胞? 若是如此:NFkb由于可以调控多种下游基因的表达,它在基因组上每个调控基因的结合序列都是特异的吗?或者说这段序列是固定的吗?如何在网上找呢?谢谢 longgyin8341
【求助】请教一个关于双荧光素酶报告基因检测系统中共转染两种报告基因质粒的比例的问题?
lsdcfhyj 用双荧光素酶报告基因检测系统进行报告基因检测时需要共转染两种荧光素酶报告基因质粒,但是我不知道两种质粒间的比例是多少,有哪位前辈做过这方面实验的,请帮我指点一下,谢谢了 xxshc 这个比例没有特别的规定。我用的pRL-TK(海蜃素荧光素酶)的荧光值要高一些,我转20ng/孔(24孔板),作为内参.pGL3(萤火虫荧光素酶)的荧光值低一些,我转0.4ug/孔(24孔板)然后0.4ug的调整质粒。这样的话,萤火虫荧光素酶
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