2×DNA上样液(变性凝胶电泳)

特别提示：包括2×DNA上样液(变性凝胶电泳)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：2×DNA上样液(变性凝胶电泳)
英文名称：2×DNA loading buffer (for denaturating urea gels)

产品货号：2×DNA上样液(变性凝胶电泳)
产品规格：5×1ml

本制品是尿素变性聚丙*酰胺凝胶电泳时使用的上样缓冲液，适用于分离短的单链DNA。本缓冲液常用于SSR标记和AFLP、RFLP等基因分型检测。本制品中含有甲酰胺，可以解除DNA的二级结构，保持DNA的单链构型；另外，本制品中还含有溴酚蓝、二甲*菁两种色素，可以观察电泳的进行情况。溴酚蓝与二甲*菁在变性聚丙*酰胺凝胶中的迁移速率则随凝胶浓度的改变而不同，见下表：
 

变性胶浓度	溴酚蓝	二甲*菁
5%	35 bp	130 bp
6%	26 bp	106 bp
8%	19 bp	75 bp
10%	12 bp	55 bp
20%	8 bp	28 bp

注：bp数是指和色素移动相同距离的DNA片段长度。

使用方法：
使用前，先离心快甩使溶液至管底，以防开盖后造成污染。取本制品与待测DNA样品或DNA Marker等体积混匀，95℃处理5-10分钟，冰上预冷后进行电泳。

注意事项：
1、为了您的安全，使用时请使用一次性手套操作，注意防护。
2、本制品不适用于非变性聚丙*酰胺凝胶核酸电泳和蛋白电泳。

储存条件：4℃，有效期12个月。

除了2×DNA上样液(变性凝胶电泳),，我公司还供应以下相关产品：



名称：超快核酸电泳液(干粉)
货号：BTN51210
规格：50L
SuperBuffer-2是我司在SuperBuffer基础上开发的DNA/RNA 两用快速电泳液。它跟SuperBuffer一样，能以高达30 V/cm的电压电泳，达到快速电泳的目的。跟SuperBuffer 不同的是，本产品对盐离子浓度敏感度低，同时还能用于RNA电泳。

产品特点：
1.快速，电泳时间短，对分辨率要求不高的电泳(如PCR和酶切检测等)甚至可以在5-10分钟内完成。
2. 不影响后续的Southern杂交，DNA胶回收和DNA连接等反应。
3. 价格与TBE(干粉)相当甚至更便宜。
4. DNA胶回收率高于使用TAE和TBE电泳的胶回收。

储存条件：常温保存和运输，有效期两年。

使用方法：

一：溶液的配制
将本产品全部加到一个干净的容量适当的容器中，按下表的用量加入蒸馏水并在室温下用磁力搅拌器搅拌，直到干粉完全溶解(一般需要30分钟左右)。
配法一(配制20X浓缩液)：加2.5升得到20×工作液
配法二(直接配制工作液)：加水50升得到50×工作液
注：其他浓度的浓缩液配制可以按比例计算，但浓缩液浓度不能超过20×，否则干粉不能全部溶解。由于干粉含多种未彻底混合均匀的成份，所以必须一次性全部用于溶液的配制。如果缓冲液(浓缩液或工作液)长时间不用，最好灭菌后放4℃长期保存。

二：DNA电泳
将SuperBuffer-2浓缩液用蒸馏水稀释到1×，除了需要使用较高电压才能得到快速的电泳结果外，操作跟使用TAE和TBE基本一样。需注意的地方是：
1.电压：在SuperBuffer-2溶液中既可以使用常规电压，也可以使用较高电压，只是使用常规电压时，其快速的优越性就体现不出来。使用较高电压时，由于各电泳槽结构不同，最佳电压需要稍做摸索。第一次最好将工作电压调到最高电压的80%左右，即平均25 V/cm(电极距离)。对一般minigel，一般可以用250-350V 跑5-10分钟；对大的电泳槽，可用400-450V 跑5-10分钟。每次根据电泳结果和缓冲液温度决定各电泳槽的最佳工作电压和时间。一般电压越高，电泳时间越短。若在电泳时发生电流或电压逐渐下降的现象，请检查电泳仪是否设置了电流上限或功率上限。缓冲液电泳次数超过3次或缓冲液中有细菌/真菌生长也会出现此现象，需要更换新的缓冲液。
2.胶浓度：建议将琼脂糖凝胶的浓度控制在0.8%左右，对于长度在100bp以下的DNA片段，可以将琼脂糖凝胶的浓度提高到1.2%左右。由于每次溶胶过程中会丢失水份，所以最好在溶胶后适当补充水份(可以前后称重)，否则胶浓度会逐渐增加，DNA的移动速度会减低、产热会增加。使用0.8%左右的琼脂糖凝胶的好处是一方面可以节约胶的用量，另一方面可以使DNA的泳动速度更快，同时还能够提高DNA的回收率。
3.染色：如果使用EB，最好把染料加入到融化后的凝胶中(只是EB的终浓度最好为0.4 -0.5μg/mL，比使用TAE和TBE时稍高)，但也可以加入到电泳缓冲液中或/和电泳上样液中。如果使用百奥莱博低毒染料绿如蓝，最好将染料加入到融化后的凝胶中。如果只有胶中有染料，则长时间电泳后(超过20分钟)，大部分染料在高压下会与DNA 分离，DNA 条带可能会看不见或看起来很淡，此时应该再染色一次。在染色液中加入一定的量的NaCl(终浓度≥0.05 mol/L)能提高染色效果。SuperBuffer-2与SYBR Green I 也有良好的兼容性，可以结合使用。
4. DNA 条带扭曲：DNA样品中所含SDS 量过高时(SDS 主要来于上样液)，DNA条带将出现扭曲，影响实验效果。建议使用不含SDS的上样液。
5. 反复使用：1×SuperBuffer-2电泳液至少可以重复使用2-3次，如果使用大电泳槽，可以重复使用的次数会更多。
6. TAE和TBE胶：已经用TAE和TBE电泳液配置好的琼脂糖凝胶可以直接放入1× SuperBuffer-2电泳液中按上述电泳条件电泳，但有时候会有扭曲现象。

三：RNA电泳
跟DNA电泳一样，必须在使用前用水将SuperBuffer-2溶液稀释到1×，其使用方法跟DNA电泳的主要区别是：
1.电压：RNA电泳时，最高使用电压大约只有DNA 最高使用电压的一半左右，所以一般minigel可以使用150 V左右的电压。由于各实验室电泳槽规格各异，第一次电泳时，最好将工作电压调到跟MOPS电泳一样的电压，每次再逐渐往上调电压和时间，根据电泳结果和测定缓冲液的温度决定今后的工作电压。
2. RNA上样液：RNA必须与含变性剂的RNA上样液混合，并在80℃保温10分钟后冰浴2-5分钟再上样。不能直接将RNA样品上样或使用DNA上样液，否则电泳不但很难得到清晰的条带，并且在加样孔中还会有看似DNA污染的条带出现。推荐使用百奥莱博生产的RNA变性/上样/染色三合一即用型溶液RNAload。
3.胶浓度：RNA电泳最好使用1%-1.5%的琼脂糖凝胶，用1X SuperBuffer-2配制。
4.染色：同DNA电泳。