pUC18/MspI(34～501bp)品牌

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北京百奥莱博专业生产供应pUC18/MspI(34～501bp)品牌，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：pUC18/MspI(34～501bp)品牌
产地：国产|进口
规格：20T(10μg/40μl)|50T(25μg/100μl)
编号：RFT025
品牌：百奥莱博
本产品是由pUC18质粒经MspI完全酶切得到的，包括501，489，404，353，242，190，147，110，89，67，34bp DNA片段，适用于琼脂糖或聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳中DNA条带的分析。本产品为浓缩型，配有6×DNA loading buffer，使用时按照比例配制即可。



使用方法：
1. 取2μl(0.5μg)DNA加1μl 6×DNA loading buffer，3μl去离子水混匀。取2-5μl混匀品加入到琼脂糖凝胶或聚丙*(代"烯")酰胺凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl，如果加样孔宽于5mm，可以适当增加上样量)就行电泳。
注：不建议用于变性聚丙*(代"烯")酰胺凝胶电泳。
2. 建议电泳条件为2.5-3.0％的琼脂糖凝胶，电压4-10 v/cm，凝胶长度7cm；或5.0-8.0％的聚丙*(代"烯")酰胺凝胶，电压10 v/cm，凝胶长度15cm。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注：如果对聚丙*(代"烯")酰胺凝胶进行银染，由于灵敏度较高，请适当降低Marker的上样量。

注意事项：
1. 凝胶介质的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖和丙稀酰胺。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

我公司的pUC18/MspI(34～501bp)品牌，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：

·高保真平末端pfu DNA聚合酶
编号：RFT101
英文名称：pfu DNA Polymerase
规格：100U(40μl)|5×100U(5×40μl)
本品是嗜热古细菌来源的DNA聚合酶，该酶除具有5’-3’DNA聚合酶活性外，还具有很强的3’-5’外切酶活性，增强了PCR扩增的保真度。与Taq酶相比，pfu聚合酶热稳定性更好，更能忍耐较高的变性温度。Pfu的保真性是Taq DNA聚合酶的10-15倍。延伸速度为0.5kb/分钟。PCR产物3’端不带碱基A，为平滑末端，要通过平滑末端克隆法进行克隆。适用于高保真的DNA片段的扩增、DNA片段的平滑化。

试剂盒组成：
pfu DNA Polymerase(2.5U/μl)-————————40μl
10×pfu PCR buffer(含Mg2＋)—————————1ml

活性定义：1单位(U) pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30分钟内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10 nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。

贮存液：50 mM Tris-HCl (pH 8.0); 0.1 mM EDTA; 1 mM DTT; 50 mM KCl ; Stabilizers; 50% glycerol

使用方法：
1、按照下表在0.2ml PCR管中制备反应体系：

 

成分	20μl反应体系	50μl反应体系	终浓度
Template	0.04-0.2 μg	0.1-0.5 μg	as you wish
Primer 1(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
Primer 2(10μM)	0.4μl	1μl	0.2μM
10×pfu PCR buffer(含Mg2+)	2μl	5μl	1×
dNTP Mixture(10 mM)	0.4μl	1μl	200μM each
pfu (2.5 U/μl)	0.4μl	1μl	0.05U/μl
ddH2O	up to 20μl	up to 50μl	-

注1：如果需要改变Mg2+浓度，根据下表调节

PCR反应体系中Mg2+终浓度	2 mM	2.5 mM	3 mM	4 mM
20μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	0.4μl	0.8μl	1.6μl
50μl反应体系中25 mM MgSO4加入量	0μl	1μl	2μl	4μl

注2：配制反应液时，请最后加入pfu，因为本酶有很强的3’-5’外切酶活性，有可能降解引物。
2、混匀后，离心快甩将反应液收集到管底。
3、PCR仪如果没有热盖加热的话，补加25μl矿物油。
4、PCR仪上执行以下程序：

步骤	温度	时间	循环数
初始变性	94℃	3-5 min	1
变性	94℃	30 sec	25-40*
退火	50-60℃*	30 sec
延伸	72℃	0.5kb/min*
最后延伸	72℃	5 min	1

注：PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异。在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件(温度、时间等)。

注意事项：
1、pfu 酶具有 3’-5’的外切酶活性，所以 pfu 酶扩增时延伸速度远比 Taq 酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下 pfu 酶的延伸速度为每分钟 0.5kb；同时 pfu 酶的 3’-5’的外切酶活性可能降解引物，所以应最后把pfu 酶到反应体系中，并立即进行 PCR 反应。
2、pfu 酶的热稳定性比 Taq 酶好，对于 GC 含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对 pfu 酶的活性无影响。

储存条件：-20℃，有效期一年。


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·1M Tris(pH6.8)
编号：RFT062
规格：100ml|500ml
本品用于SDS-PAGE浓缩胶制备。

·植物RNA提取试剂
编号：RFT032
英文名称：Plant RNA Extraction Reagent
规格：100ml
本试剂可从植物组织，特别是富含多酚或淀粉的植物组织中(如马铃薯块茎，白松松针或嫩苗，和西红柿叶等)提取高纯度的总RNA。每100 ml可处理100 mg组织200次。

自备试剂：液氮，研钵，无RNase离心管，5 M NaCl(无RNase水配制)，*仿，异丙醇，75%乙醇(无RNase水配制)，无RNase水。

少量提取操作步骤(样品少于0.1 g)：
1.取不多于0.1g植物组织，在液氮中研碎，转移到1.5 ml 离心管中，加0.5 ml提取试剂，振荡至彻底混匀。
注：振荡不要太剧烈，否则容易导致基因组DNA污染。
2.室温放置5分钟。
3.4℃条件下12000 rpm离心2-3分钟，上清转入新的无RNase离心管。
4.上清中加入0.1 ml5 MNaCl(无RNase水配制)，温和混匀。
5.加入0.3 ml *仿，上下颠倒混匀。
6.4℃条件下12000 rpm离心10-15分钟，取上层水相转入新的无RNase离心管。
7.加与所得水相等体积的异丙醇，混匀，室温放置10分钟。
8.4℃条件下12000 rpm离心10-15分钟。弃掉上清，注意不要倒出沉淀。加1 ml 75%乙醇冲洗沉淀。(沉淀可能很难看见，应小心操作。)
9.4℃条件下5000-7000rpm离心3分钟。倒出液体，注意不要倒出沉淀。剩余的少量液体短暂离心，用枪头吸出，室温晾干1-2分钟至沉淀干燥。
10.加适量无RNase水充分溶解RNA，-70℃保存。

注意：本试剂有刺激性味道，操作时请在通风处进行。

储存条件：4℃，有效期6个月。

·5×加A反应液
编号：RFT097
英文名称：5×A-plus MasterMix
规格：20次(200μl)
本品由pfu、Pwo、Vent或KOD等有3’→5’外切酶活性的高保真DNA聚合酶扩增的PCR产物为不带A尾的平末端DNA片段，如该平末端DNA片段需要和T载体相连接，需要先利用加A反应液在平末端片段后加上A尾后才能与T载体的T头互补连接。本MasterMix提供了加A尾需要的所有成分，可以在20分钟左右完成整个过程。用于平末端片段的加A反应。

使用方法：
1、平末端PCR产物用PCR产物纯化试剂盒(无非特异扩增；货号RTP2202)或凝胶回收试剂盒纯化(有非特异扩增，货号RTP2201)回收。
2、纯化后的平末端DNA片段按照以下反应体系加A，全量为50μl：
平末端DNA片段——————0.5～5μg
5×加A反应液-——————10μl
ddH2O——————————up to 50μl

储存条件：-20℃，避免反复冻融，有效期一年。


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·DNA Marker I(100～600bp)
编号：RFT018
规格：100T(2×250μl)
本产品是由6条带状双链DNA条带组成的DNA Marker，适用于琼脂糖凝胶电泳中DNA条带的分析。含有1×loading buffer，可根据实验需要，直接取2-5μl电泳，使用方便，电泳图像清晰。6条带的大小和含量分别为100bp(50ng/5μl)，200bp(50ng/μl)，300bp(50ng/μl)，400bp(100ng/μl)，500bp(50ng/μl)，600bp(50ng/μl) 。该Marker适用于DNA片段大小的确定和对DNA含量的精确定量。



使用方法：
1. 取2-5μl本产品加入到琼脂糖凝胶的加样孔中就行电泳。
注：根据电泳梳子的厚度和宽度确定上样量。每1mm×1mm(厚度×宽度)加样孔上样1μl；窄齿梳子(一般为1mm×2mm)上样2μl；宽齿梳子(一般为1mm×5mm)上样5μl。如果使用厚齿梳子或宽于5mm的梳子，可以适当调整上样量。
2. 建议电泳条件：凝胶浓度为2.0-2.5％，凝胶长度5-7cm，电泳电压4-10v/cm，电泳时间20-25分钟。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。

注意事项：
1. 琼脂糖的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的琼脂糖凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

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