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- 百奥莱博
- JN0017-ETS
- 北京
- 2025年07月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
449
- 英文名：
KOF DNA Polymerase
- 保质期：
长期
- 供应商：
北京百奥莱博科技有限公司
- 规格：
250U
特别提示：包括KOF DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！
产品名称：KOF DNA聚合酶
英文名称：KOF DNA Polymerase
产品货号：JN0017
产品规格：250U
本酶是一种经过基因工程改造的高保真DNA聚合酶，具有极强的3"→5"核酸外切酶活性（Proof-reading活性），当聚合反应发生碱基错配时，聚合酶的校正活性可将错配的碱基切除。与普通pfu相比，保真性更高，约为普通taq的50倍，普通pfu的6倍。其扩增性能也比普通Pfu高，成功克服了普通pfu酶扩增效率低的缺陷。
产品组成：
| 组份 | JN0017-250U |
| KOF DNA 聚合酶（1U/ul） | 250ul |
| dNTP混合液 | 250ul |
| 10X KOF Buffer with Mg2+ | 2ml |
产品用途：用于要求保真度高的PCR反应，包括克隆PCR，DNA片段拼接，引入突变，全基因合成，DNA片段的补平等。
使用建议：
KOF DNA Polymerase 产生的PCR产物为平滑末端，无3’端“A”突出，其PCR产物的克隆有几种方案。
1、PCR前引物进行5’ 加磷修饰或将PCR产物磷酸化处理后再直接克隆于平滑末端的载体中（参见实验方案）。
2、将产物3’ 末端加A后再与T载体连接（参见实验方案）。
3、引物中引入15bp与载体同源序列，利用BalbRec PCR产物一步定向无缝克隆试剂盒（Cat#JN0001）直接连接到目的载体。
由于KOF DNA聚合酶的校正活性可引起引物从3’ 端被部分降解。因此在设计引物时应适当增加引物的长度，理想的引物长度为20-30bp。另外为了减少由3’→5’外切酶活性引起的引物降解，尽量在冰上配制反应体系，并最后加入KOF酶。
应用实例：
图例一）50ul扩增体系中，以5ngλDNA为模板，对0.6kb～12.0kb片段的扩增结果。
泳道1：0.6kb；泳道2：1.0kb；泳道3：2.0kb；泳道4：3.0kb；泳道5：4.0kb； 泳道6：8.0kb；泳道7：10.0kb；泳道8：12.0kb；泳道M：1kb DNA Marker；
图例二）50ul扩增体系中，分别以50ng～0.05ng质粒为模板进行的灵敏度的扩增结果。
泳道1：50ng；泳道2：5ng；泳道3：0.5ng；泳道4：0.05ng；泳道M：DNA 2000 ladder
常用反应体系（50μl）
| 10X KOF Buffer | 5μl |
| 上游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
| 下游引物 | 0.2-1.0μM(终浓度) |
| dNTP(各10mM) | 1.0μl |
| 模板 | 1-50ng（质粒） |
| 10ng-1μg(基因组) | |
| KOF | 1μl |
| ddH2O | 至50μl |
常用PCR循环：
当扩增片段＜3K：
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 94℃ | 1分钟30秒 | |
| 94℃ | 20秒 | 30次循环 |
| 57℃ | 20秒 | |
| 72℃ | 根据产物长度调整，60秒/kb | |
| 72℃ | 5分钟 | |
| 4℃ | 保温 |
当扩增片段≥3K（推荐引物长度≥30bp）：
| 温度 | 时间 | 循环数 |
| 94℃ | 5秒 | 30次循环 |
| 68℃ | 根据产物长度调整，60秒/kb | |
| 72℃ | 5分钟 | |
| 4℃ | 保温 |
质量保证：经过多次柱纯化，SDS-PAGE检测纯度大于95%；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内，外切酶污染。
活性定义：在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量为一个单位。
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