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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
67
- 英文名:
Native Gel Sample Loading Buffer,5X
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
2ml
特别提示:包括非变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X)在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:非变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X)
英文名称:Native Gel Sample Loading Buffer,5X
产品货号:YT054
产品规格:2ml
本品是一种经过改良的以溴酚蓝为染料,5倍浓缩的蛋白上样缓冲液,本产品中不含SDS等变性试剂,也不含DTT、巯基乙醇等还原性试剂,可以用于常规的非变性非还原性聚*烯酰胺凝胶(PAGE)蛋白样品的上样。
储存条件:-20℃,有效期一年。
除了非变性非还原性蛋白上样缓冲液(5X),,我公司还供应以下相关产品:
名称:APMSF溶液(10mg/mL)
货号:BTN130535
规格:1mL
本产品为浓度为10mg/mL的水溶液,其工作浓度为10-40μg/mL(10-20μM)。对脒苯基甲磺酰氯(4-Amidino Phenyl Methane Sulfonyl Fluoride,APMSF,p-APMSF)分子量为216.2,溶于水。可以特异性、不可逆抑制胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶活性,如,胰蛋白酶、凝血酶、血浆酶等。毒性比PMSF低,不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期6个月。
名称:蛋白印迹膜再生液
货号:WE0304
规格:100ml|500ml
本产品采用温和洗涤配方,可在不影响目的蛋白的情况下,去除结合在印迹膜上的一抗和二抗,使同一张膜可进行多次抗体检测,无需反复电泳和转膜,节省样品和时间,适用于使用NC或PVDF膜进行Western Blot检测时条件的优化或同一样品不同蛋白的检测。
注意事项:建议先检测表达量较低的目的蛋白,用再生液处理后检测表达量高的蛋白,如内参蛋白等。
操作步骤:
1、将曝光后的膜取出,加入适量的Stripping Buffer(蛋白印迹膜再生液),再生液充分覆盖膜表面,8.5 cm×5.5 cm膜加入15ml左右蛋白印迹膜再生液,室温振摇孵育15分钟左右(孵育时间应根据不同的目的蛋白来调整:比如内参抗体等表达量较高的蛋白,使用蛋白印迹膜再生液时可以延长孵育时间至1小时或者在37℃孵育30分钟)。
2、弃去蛋白印迹膜再生液,用15ml缓冲液(PBST或TBST)洗膜3次,每次5 分钟,室温振摇。
3、为了检测酶标二抗洗脱是否完全,此时可以用显色方法来确定二抗是否洗脱掉。
4、待检测完毕,确认膜上无残留的酶活性,再生后的膜通过加入15ml的封闭液进行封闭,室温30分钟或者4℃封闭过夜。
5、重新加入待测一抗,进行下一轮的WB实验。
储存条件:室温
名称:kFluor488标记抗兔免疫荧光染色试剂盒
货号:KFS040
规格:300T
适用于细胞或组织切片的免疫荧光染色。在有适当的一抗检测特定的目标蛋白时,就可以使用免疫荧光染色试剂盒检测到红色、绿色或蓝色等荧光。含kFluor488标记的山羊抗兔IgG(H+L)抗体,可以用于检测兔来源的相应一抗,观察到的颜色为非常鲜艳的绿色。
kFluor488(Ex/Em:495nm/519nm)是一种常用的非常明亮的绿色荧光探针。它比绝大部分常用的绿色荧光探针更加明亮,更加不容易淬灭,而且背景更低。kFluor488的荧光光谱与FITC和Cy2比较接近。
本试剂盒提供了含有荧光标记抗体稳定剂的免疫荧光染色二抗稀释液,可以确保荧光标记抗体稀释后在4℃可以保存长达6个月,并且在6个月内至少可以重复使用10次。
本试剂盒含有抗荧光淬灭封片液,可以使荧光更加持久。
本试剂盒对于六孔板内的细胞样品或常规切片,至少可以检测300个样品。
注意事项:
1. 需荧光显微镜或激光共聚焦显微镜。
2. 在使用抗荧光淬灭封片液的情况下可以减缓淬灭,但仍宜尽量避光,特别是需要尽量缩短在荧光显微镜下的观察时间。
3. 荧光物质均易发生淬灭,染色后宜尽快进行荧光显微镜下的观察。如果不能及时观察可以4℃避光保存,但存放时间通常不宜超过一周,随着存放时间的延长可能会导致观察效果越来越差。免疫荧光染色效果的好坏和一抗的关系非常密切。建议选购有较多文献报道的并注明可以用于免疫荧光染色的一抗用于本实验。
4. 如果观察时发现荧光过弱,可以适当提高一抗的浓度;如果荧光还是比较弱,可以适当提高荧光标记抗体的浓度。
5. 需自行配制用于免疫荧光染色的相关试剂,需自备盖玻片和载玻片。
6. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
储存:2-8℃,避光,有效期6个月。
名称:细胞爬片抗原修复液(1X)
货号:QN1256
规格:100mL|500mL
细胞爬片抗原修复液是一种特别适合用于细胞爬片的快速抗原修复液,只需室温孵育 5 分钟即可完成对细胞爬片样品使用*聚甲醛、甲醛或其它醛类试剂固定后的抗原修复。
使用说明:
1、细胞爬片固定后用 PBS 洗涤 3 次,每次 5min。
2、加入抗原修复液使其覆盖住细胞爬片,室温孵育 5min。
3、PBS 洗涤细胞爬片,重复 3 次,每次 5min。充分洗涤残留的 SDS,以免造成抗体失去活性。
4、封闭液封闭细胞爬片。
5、随后即可进行一抗孵育等后续的免疫染色步骤。
储存条件:室温 1年
名称:植物胞质蛋白提取试剂盒
货号:HR0163
规格:50T/100T
植物细胞质蛋白提取试剂盒提供全套试剂,适用于从各种植物细胞和各种实体植物组织,如叶片、根、种子等植物组织中提取细胞质蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。制备的蛋白不仅纯度高,保持天然活性,而且绝少交叉污染。提取的蛋白可用于Western Blotting、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、免疫共沉淀、酶活性测定等蛋白研究。
储存条件:蛋白提取液2-8℃保存;蛋白酶抑制剂-20℃保存。
有效期:一年。
注意事项:
●本试剂盒仅供科学研究使用。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖和管内壁上的液体离心至管底,避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用,否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿,可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
产品特点:
1.使用方便。
2.将蛋白提取的时间缩短至 30分钟-1小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
试剂盒以外自备试剂和仪器:
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管
● 涡旋振荡器 ●冰箱,冰盒
使用方法:
使用注意事项:
● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
●蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
●可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
1.提取液制备:每500μl预冷的蛋白提取液A中加入2μl蛋白酶抑制剂;每200μl蛋白提取液B中分别加入2μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2.取洗净擦干后并去除叶梗和粗脉的200mg植物组织样本剪碎,采用以下一种方法处理:
A、加入500μl提取液A 后用匀浆机/匀浆器匀浆。
B、置于研钵中用液氮研磨,研磨后加入500μl冷的提取液A。
C、加入500μl提取液A直接置冰上研磨。
3.高速涡旋振荡 5秒,然后在4℃,100×g 力条件下离心1分钟。
4.收集上清,弃沉淀。
5.将上清在 4℃,600×g 力条件下离心1分钟。
6.收集沉淀,将上清移入另一干净的离心管。
7.在步骤 6中的上清中加入50μl 胞质提取液B,高速涡旋振荡15秒,充分混匀。
8.置冰上40分钟,每隔10分钟高速涡旋振荡15秒。
9.在 4℃,16000×g条件下离心10分钟。
10.将上清吸入另一预冷的干净离心管,即得到细胞质蛋白。
11.将上述蛋白提取物定量①后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验②。
注:
① 建议用BCA法进行蛋白定量。
②蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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文献和实验免疫印迹法(immunobiotting test,IBT)
,需要测定每个蛋白样品的蛋白浓度。根据所使用的裂解液的不同,需要采用适当的蛋白浓度测定方法。因为不同的蛋白浓度测定方法对于一些去垢剂和还原剂等的兼容性差别很大。更方便的方法是选用成套的裂解液和定量试剂盒测定蛋白质。如果浓度过高,可按比例稀释,读出蛋白浓度后,再折算回原样品浓度。 3. 电泳(Electrophoresis) 配制SDS-PAGE凝胶,在收集的蛋白样品中加入适量浓缩的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。例如2X或5X的SDS-PAGE蛋白上样缓冲液。使用5X的SDS
器上)2 小时。3. 4 ℃ 下在微型离心机中以 16000 × g 离心 20 分钟。轻轻地从离心机中取出离心管,置于冰上。将上清液转移至放置在冰上的新离心管中。弃去沉淀。二、样品制备1. 取出小部分 (50 μL) 裂解物,用于蛋白分析。确定每种细胞裂解物的蛋白浓度。2. 向剩余体积的细胞裂解物中加入等体积的 2× Laemmli 样品缓冲液。我们推荐采用以下方法来还原样品和使样品变性,除非在线抗体数据表指明应使用非还原和非变性条件。3. 还原和变性:在 100 ℃ 下将样品缓冲液中的每种细胞裂解物煮沸
糖,建议进行 Pre-clear;如果使用磁珠,此步可忽略 抗 X 抗体的轻链(25 kD)和重链(50 kD) 更侧重于如何在实验上进行优化(见下文) *注意:总蛋白上样量过多也会造成 非特异性结合,建议上样量为 500 ug-1 mg。上样之前一定要先用 BCA 定个量!定个量!定个量! pre-clear:上样前先用裂解液过一遍柱子,减少基质本身对蛋白的吸附 Output:在某些 co-IP 实验中,实验人员会把IP后的上清分别进行诱饵蛋白 X 和靶蛋白 Y 的 WB 检测
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