
外泌体提取(细胞培养上清或尿液)
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商:
上海信裕生物科技有限公司
- 规格:
10/24盒
外泌体提取(细胞培养上清或尿液)产品描述
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于血清、血浆中的外泌体提取,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA粒径分析、蛋白分析研究等。
产品组成
自备材料
1,高速离心机 (可以达到10000 g离心力),2 mL离心转子,1.5 mL离心管;
2,1×PBS缓冲液(无菌);
外泌体提取(细胞培养上清或尿液)操作规程
一、样品预处理
1,取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
2,样品初始用量:(单次提取时的样品量)
3,离心去细胞碎片:将样品转移至离心管中,于4℃以3000 g离心10 min,去除样品中的细胞碎片;
4,上清液转移:去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中;
5,离心去杂质:转移后的上清液于4℃以10000 g离心20 min,去除样品中杂质,将离心后的上清液转移至新的离心管中。
二、外泌体提取(细胞培养上清或尿液)提取外泌体
1,上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入Blood IsoExo Solution (BIS)试剂,具体的加入剂量如下:
(注:其他剂量规格请根据表中的试剂用量等比例换算)
2,溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2h;
3,沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净上清液)
4,外泌体重悬:取50 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;(建议PBS液加入体积:初始样本体积=1:4)
5,外泌体提取(细胞培养上清或尿液)收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
6,外泌体的保存:提取后的外泌体保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。
储存条件
本品在室温可稳定保存24个月,使用前请充分混匀。
注 意
本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其他用途!
外泌体是由细胞分泌的包含RNA和蛋白质的小囊泡(30-150 nm),在血液、唾液、尿液及乳汁等体液中大量存在。外泌体被认为具有细胞间信使的功能,在特定细胞之间传递它们的效应物或信号分子;然而其构造、效应物组成以及所参与的生物学通路目前尚不明晰。
外泌体的生物学功能研究中需要分离完整的外泌体颗粒,而传统超速离心方法步骤繁琐、硬件要求高、操作难度大。宇玫博生物自主开发的外泌体快速提取试剂盒,组分经过优化处理,适用于血清、血浆中的外泌体提取,可快速高效地获得高纯度外泌体颗粒,可用于电镜分析、NTA粒径分析、蛋白分析研究等。
产品组成
| 组分名称 | 规格 |
| Blood IsoExo Solution*(BIS) | 100 mL |
| *RNase/DNase Free, Sterile |
1,高速离心机 (可以达到10000 g离心力),2 mL离心转子,1.5 mL离心管;
2,1×PBS缓冲液(无菌);
外泌体提取(细胞培养上清或尿液)操作规程
一、样品预处理
1,取样:如果是冻存样品,从冰箱取出后于25℃水浴中进行解冻,将完全融化后的样品置于冰上;如果是新鲜样品,收集样品后置于冰上;
2,样品初始用量:(单次提取时的样品量)
| 样品名称 | 最低量 | 最高量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
4,上清液转移:去除细胞碎片的离心上清液转移到新的离心管中;
5,离心去杂质:转移后的上清液于4℃以10000 g离心20 min,去除样品中杂质,将离心后的上清液转移至新的离心管中。
二、外泌体提取(细胞培养上清或尿液)提取外泌体
1,上清液预处理:在去除杂质的离心上清液中加入Blood IsoExo Solution (BIS)试剂,具体的加入剂量如下:
| 样品名称 | 样品剂量 | BIS剂量 |
| 血 清 | 0.2 mL | 1 mL |
| 血 浆 | 0.2 mL | 1 mL |
2,溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,通过涡旋振荡器混匀1 min,再放置于2℃至8℃静置2h;
3,沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;(注:尽可能吸净上清液)
4,外泌体重悬:取50 μL 1×PBS均匀吹打离心沉淀物,待其均匀悬浮在PBS中后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;(建议PBS液加入体积:初始样本体积=1:4)
5,外泌体提取(细胞培养上清或尿液)收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
6,外泌体的保存:提取后的外泌体保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。
储存条件
本品在室温可稳定保存24个月,使用前请充分混匀。
注 意
本产品仅用于生命科学研究,不得用于医学诊断及其他用途!
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文献和实验相关实验
高质量尿液外泌体如何提取
细胞上清外泌体细胞上清外泌体提取图解过程 1.核对样本 2.离心,3000g,15min; 3.离心后样本(有略微沉淀) 4.将样本转移至新的 50ml 管并加 ECS 试剂; ECS 与试剂有明显分层; 震荡混匀; 5.在 4 度冰箱静置 2H 以上,离心 10000g,60min; 6.离心后的样本(沉淀明显,沉淀中富含外泌体) 将上清吸出留下沉淀,将离心管倒扣于纸上自然晾干残留的上清液; 7.加 PBS 重悬沉淀; 用 PBS 洗脱后的沉淀 8.离心进一步去除
碎片物,这时候的上清液就可以进行保存了。短期 3 ~ 4 天左右使用的话,则可以放到 4℃ 的冰箱中,而长期个把月后使用的话,则在 -80℃ 进行保存,使用前取出来 4℃ 自然融化即可。那么这些离心操作是否可以不做呢?不可以的。细胞上清液处理的越早越好,处理晚时存留细胞会坏死而破碎,更多的胞内囊泡就会释放出来了,这时候的样品就更加的复杂了,更不利于后期的研究了。 然后,针对细胞上清液的初步浓缩。之前在做技术答疑时,并没有建议做初步的浓缩操作,但是后来越来越多的同学遇到在细胞外泌体提取过程中无论采取
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外泌体提取(细胞培养上清或尿液)
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