- ¥160 - 280
- 晶抗
- JK2488
- 进口/国产
- 2025年07月14日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保质期：
12个月
- 供应商：
上海晶抗生物工程有限公司
- 保存条件：
4℃ 避光
- 规格：
2×50ml/2×100ml
| 规格： | 2×50ml | 产品价格： | ¥160.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 2×100ml | 产品价格： | ¥280.0 |
3,3',5,5'-四甲基(TMB)是非常优越的酶免试验显色剂，能溶解于多种有机溶剂和双蒸水中，为稳定的无色溶液，与适量或与缓冲液混匀后，与过氧化物酶作用产生清晰的蓝色产物，极易观察。由于其灵敏度高，配制后的工作液稳定，加上无致癌特性，被广泛用于酶联免疫(ELISA)试验和尿试纸的检测反应等。TMB主要应用于酶联免疫吸附实验(ELISA)，经典的方法是采用A、B液分开配制，使用前再混合的方法，并且长期存放稳定。本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅。
操作步骤(仅供参考)：
1、用适当的干净容器(用纯净水反复冲洗)，取试剂(A)、(B)、(C)，按A：B：C= 5000:5000:4混合，待达到室温后即可使用。
2、加液：加完HRP结合物并温育一定时间后，洗板3～5次，每孔加TMB显色液100ul。 根据个人实验需要，在室温(15～25℃)或37℃下温育10～30分钟。
3、终止：加等体积的1M盐酸或硫酸溶液终止反应，孔中反应液由蓝色变为。
4、读数：终止反应后30min内在450nm处读数。
注意事项：
如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。
为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数，或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物，再次进行试验。
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文献和实验显色（HRP酶） 1．增强化学发光法(ECL) Ecl 显色原理：氨基苯二酰肼类主要是鲁米诺及异鲁米诺衍生物，是最常用的一类化学发光剂。鲁米诺（luminol，5＇-氨基-2，3-二氢-1，4-酞嗪二酮）的分子结构及化学反应式如下： 鲁米诺在免疫测定中既可用作标记物，也可用作过氧化物酶的底物。在Ecl底物中，含有H2O2和鲁米诺，在HRP（辣根过氧化物酶）的作用下，发出荧光来。 试验步骤： 1）将两种显色底物1：1等体积混合（一般各1ml/membrane）。
在目前的以HRP作为标记酶的商品ELISA试剂盒中，如以TMB为底物，则提供的底物为A和B两瓶应用液；如以OPD为底物，则试剂盒提供OPD片剂或粉剂，临用前配制。一般商品试剂盒显色反应条件为37℃或室温反应15~30min。从理论上说，37℃30min才可以使HRP的底物催化反应完全，尽管在最初的10min内，绝大部分催化反应即可完成。因此，为使弱阳性样本孔能有充分的显色，建议在37℃下反应25~30min后，终止反应比色测定。此外，在加入底物开始显色反应前，最好是先检查一下底物溶液的有效
以及人IgGFc段的自身抗体，多数为IgM类，能充当抗原成分与固相及酶标抗体反应，从而呈现非特异性显色。 黄疸血标本中常含有内源性过氧化物酶，如用辣根过氧化物酶为标记物，就有可能产生非特异性显色。 2、外源性干扰物，常常因样品采集、贮存、处理不当造成如样品溶血，被细菌污染，标本凝集不全等。溶血标本，红细胞溶解破裂，释放出血红素形成，而血红素中的铁卟啉是过氧化物酶的类似物，以HRP为标记的ELISA测定中，溶血标本可能会增加非特异性显色。如有细菌污染，菌体中可能含有内源性HRP（辣根过氧化酶）[2]，有国内报道
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