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全血基因组DNA提取试剂盒

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  • ¥100 - 1000
  • 上海烜雅
  • XY-MY-1029
  • 国产/进口
  • 2025年07月13日
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      100

    • 保质期

      一年

    • 供应商

      上海烜雅生物科技有限公司

    • 保存条件

      -20℃,避免反复冻融

    • 规格

      20

    全血基因组DNA提取试剂盒使用说明
    全血基因组
    DNA提取试剂盒的操作步骤: 

    使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇,加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机
    在室温下离心。
     
    样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的 0.lml-1ml 血液样品):
    a、在血液样品中加入 2-3 倍体积的红细胞裂解液,充分颠倒混匀,12000rpm 离心 1min,小心吸去上清,沉淀
    应为白色或淡红色,如果裂解不彻底,可重复以上述步骤一次。向沉淀中加 200ul 溶液 YA,振荡至彻底混匀。
    b、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,因此处理量为 5-20u1,
    不需要再用红细胞裂解液处理,直接加 200ul 溶液 YA,振荡至彻底混匀。
     
     
    向悬浮液中加入 20ul 的 RNase A (10mg/ml),充分颠倒混匀,室温放置 10min。
     
    加入 20ul 的蛋白酶 K( 10mg /ml ),充分颠倒混匀,65℃水浴消化 30-60min,消化期间可颠倒离心管混匀数
    次,直至样品消化完全为止。

     
    加入 200ul 溶液 YB,再加入 200ul 无水乙醇,充分颠倒混匀,此时可能会出现絮状沉淀,不影响 DNA 的提
    取,可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中,室温放置 2min。

     
    12000rpm 离心 2min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

     
    向吸附柱中加入 600ul 漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸  附柱放入收集管中。

     
    向吸附柱中加入 600ul 漂洗液,12000rpm 离心 1min,弃废液,将吸附柱放入收集管中。

     
    12000rpm 离心 2min,将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟,目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除,
    否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。

     
    将吸附柱放入一个干净的离心管中,向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液,室温放置
    5min,12000rpm 离心 1min。

     
    离心所得洗脱液可再加入吸附柱中,12000rpm 离心 2min,即可得到高质量的基因组 DNA。

     
    注意事项:
     
    本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月,更长时间的保存可置于2 -8℃。

     
    常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等,需注意的是,如欲制备大分子量血液基因组DNA,可优先考虑
    使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝,因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时,有PCR扩增
    抑制现象。

     
    样品应避免反复冻融,否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。

     
    如果试剂盒中的溶液出现沉淀,可在65℃水浴中重新溶解后再使用,不影响效果。

     
    绝大多数哺乳动物全血中的红细胞无核,故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞,以免影响
    白细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液,其红细胞为有核细胞,
    因此处理量减少为5-20ul,不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。

     
    洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul,体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响;若需要
    用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围),pH 值低于7.0会降低洗脱效率。

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