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- 上海烜雅
- XY-MY-1025
- 国产/进口
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
100
- 保质期：
一年
- 供应商：
上海烜雅生物科技有限公司
- 保存条件：
-20℃。避免反复冻融
- 规格：
20
动物组织/细胞基因组DNA提取试剂盒使用步骤如下：
操作步骤：
使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入休积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
1、样品的处理：
a、细胞：取1×106-1×107个悬浮培养细胞，12000rpm离心1min收集细胞，贴壁细胞先用胰蛋白酶消化处理，再用预冷的PBS吹打成细胞悬液，然后12000rpm离心1min收集细胞，尽量除去上清，加200ul溶液A，振荡至彻底混匀。
b、组织：组织量不宜过大，一般不要超过25mg，可以使用匀浆器匀浆，最好用液氮研磨成粉末状，再用预冷的PBS或无菌水充分悬浮，然后12000rpm离心1min收集细胞，尽量除去上清，加200ul溶液A，振荡至彻底混匀。
2、向悬浮液中加入20ul 的RNase A (10mg/ml)，55℃放置15min。
3、加入20ul 的蛋白酶K( 10mg /ml )，充分颠倒混匀，55℃水浴消化，细胞消化时间较短，组织消化时间较长，一般需要1-3个小时才能完成（鼠尾需要消化过夜）。消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。消化完全的指标是：液体清亮及粘稠。
4、加入200ul体积溶液B，充分颠倒混匀，如出现白色沉淀，可放置于75℃ 15-30min，沉淀即会消失，不影响后续实验。如溶液未变清亮，说明样品消化不彻底，可能导致提取的DNA量少及不纯，还有可能导致堵塞吸附柱。
5、加入200ul无水乙醇，充分混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中。
6、12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
8、向吸附柱中加入600ul漂洗液，12000rpm离心1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。
9、12000rpm离心2min，将吸附柱敞口置于室温或50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR等。
10、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加50-200ul经65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心2min。
11、可将离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心2min，即可得到高质量的基因组DNA。
注意事项:
1、试剂盒拆封后，RNase A和蛋白酶K需放置-20℃保存。
2、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。
3、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。
4、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率：洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。
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