明胶酶谱实验

基质金属蛋白酶（matrix metalloprotease，MMP） 是肽链内切酶，可降解细胞外基质（extracellular ma�6�7 trix，ECM）的蛋白质成分，使其恢复和重建，通过这 种方式使ECM和基底膜在生理过程和病理条件下 能保持适当的结构 。目前有20多种MMP，根据它 们的细胞定位可分为分泌型和膜型两大类；根据它 们的构型和底物专一性又可分为五大类，即胶原酶、 明胶酶、膜型基质金属蛋白酶、间质溶解素和基质溶 。体内MMP的异常可诱发许多疾病的发展, 包括癌症、纤维化、关节炎、心血管疾病、神经和自身 免疫性疾病等 。尤其是明胶酶A（MMP-2）和B（MMP-9），在肿瘤的转移和血管生成方面起重要的 作用。 利用明胶酶谱实验检测细胞分泌的明胶酶活性，是现代分子生物学研究中经常使用的重要实验。

明胶酶谱实验是一个多步骤的实验过程，其中有很多步骤都会引起杂带、杂斑或出现杂乱的明 胶降解，而影响结果分析。为解决这些问题，我们在 传统实验方法 的基础上，针对实验过程中的一些细节提出一些建议：过硫酸胺未溶解前，一定要注意 干燥保存；样品中尽可能不含血清；明胶一定要 溶解彻底，制备聚bing烯xian胺时应注意排除气泡；内 槽电泳液一定要用新配置的，不能回收利用，外槽的 电泳液虽可回收利用，但回收次数好不要太多；外 槽加液量不能比内槽高，应比内槽稍低，但也不要低太多；浓缩胶中的Tris-HCl （pH6.8）的浓度要控制 好；用2.5% Triton X-100 洗脱时要充分；染色 液可回收利用，但其中的乙酸和甲chun易挥发，在重复 利用时可以适当向回收液中增加乙酸和甲chun，以提高染色效率。

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