Hotstart Taq酶

Hotstart Taq酶各位从事科研工作的小伙伴们，实验中所用到的试剂、配制试剂的液体，有时可能是实验成败的关键，因此大家在使用时一定要留意各种试剂的级别。原则上讲，纯度越高越好，但是价格也就越高，所以要根据各自的需要选择合适的品质，避免不必要的浪费！
Hotstart Taq酶
英文名称：Hotstart Taq DNA Polymerase  
其他名称：Hotstart Taq DNA聚合酶  
分子量：94kDa，单体  
级别：BR  
纯度：≥99%  
浓度：5u/ul  
活性定义：在74℃、30分钟内，使10nmol脱氧核糖核酸合成渗入多聚核苷酸（吸附在DE-81上）所需的酶量  
酶活性分析混合物：25mM TAPS(PH9.3,25℃), 50mM KC1, 2mM MgCL2, 0.2mM各种dATP,dGTP,dTTP, 0.1mM dCTP, 0.75mM活化的鲑鱼精DNA和0.4MBq/ML(3H).-dTTP  
保存缓冲液组分：20mM Tris-HCL(PH9.0), 1mM DTT, 0.1mM EDTA,100mM KC1, 0.5%(V/V) Tween 20，0.5%(v/v) Nonidet P40和50%(v/v)甘油  
10×Hot start PCR Buffer：200mM Tris-HCL(PH8.3,25℃), 200mM KC1, 50mM (NH4)2SO4  
抑制剂：阴离子去污剂（脱氧胆酸、肌氨酰和SDS的浓度分别高于0.06、0.02和0.01%时）  
失活：酚/氯抽提  
质量控制：相关测试表明无内切或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染  
功能启动：热启动PCR  
性状(以下信息仅供参考)：液体。设计用于增强DNA扩增的特异性、敏感性和产量。使用该酶可在室温配制反应体系，使用方便。它是一种化学修饰的重组Taq DNA Polymerase，蛋白分子氨基酸残基上增加了热不稳定的封闭基团。该酶在室温下没有活性，避免形成引物二聚体和非特异性延伸，从而增加DNA扩增的特异性。95℃加热4分钟可恢复活性。活化的酶具有与Taq DNA Polymerase相同的功能：催化5——3方向合成DNA，无可检测的3——5校正外切酶活性，具有较低的5——3外切酶活性。该酶还具有脱氧核糖核酸酶转移活性，在PCR产物的3-端多加11个腺嘌呤，活化前检测不到这些活性。用途：
本品仅供科研，不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)高产量扩增复杂模板；PCR特异性高-降低错配效应和减少引物二聚体的生成；增强的PCR敏感性；使用方便，室温配制PCR反应体系；扩增产物具有3-dA突出末端；热启动PCR；高产量扩增长达3kb片段；RT-PCR；特异性扩增复杂cDNA和基因组模板；扩增低拷贝DNA模板；实时PCR；多重PCR；制备TA克隆用PCR产物  保存：
-20℃，保质期1年  

Hotstart Taq酶试剂间的干扰原因：
试剂中含有下一测试所要测定的底物，或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用，因而直接干扰下一反应的测定结果；
该试剂所引导的反应对下一项目的反应进程带来了间接的干扰，因为在有试剂污染的情况下，下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。下面通过对试剂成分的分析和相应试验来找出试剂交叉污染可能带来的情况，进而指导相应的项目调整和结果分析
Hotstart Taq酶试剂间可能发生的干扰情况
1.ALT（IFCC）、AST（IFCC）试剂中含有高活力LD成分，有可能会对LD的测定带来干扰；
2.ALP（IFCC）、CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）、CO2（PEPC）、α-Amy(EPS)等试剂中使用缓冲液，可能会对其后的Mg2+ 测定带来干扰；
3.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等试剂使用缓冲液，可能会对无机磷的测定带来干扰； 
4.CK（NAC-activated）、CK-MB（NAC-activated）试剂中含有Glu成分，其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程，因此可能对Glu测定带来干扰，尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰；
5.Mg2+试剂 (Calmagite)中含有EGTA成分，为Ca2+络合剂，可能对Ca2+的测定带来干扰； 
6.个别试剂以甘油做酶的保护剂，因此可能对TG的测定带来干扰，等等； 
7.低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇的试剂成分中都含有CE、CHOD、POD酶，都会与血清成分反应，生成的中间反应产物是H2O2浓度,因为低密度脂蛋白和甘油三酯检测单位都是mmol/L级,而尿酸检测单位是μmol/L级,二者之间相差1 000倍,故检测尿酸的反应杯中只要残留极少量的低密度脂蛋白和胆固醇试剂就可产生大量的H2O2,直接导致尿酸的检测结果的升高；
8.葡萄糖对尿酸试剂的干扰GLU(OX)与UA测定原理均采用Trider's反应方法,试剂探针残留携带的GLU带入到UA反应体系,发生血糖反应其产物红色醌亚胺与UA产物红色醌亚胺颜色叠加,而血清中正常血糖含量远高于尿酸水平,从而导致UA结果严重偏高； 
9.胆固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL) 会对总胆汁酸检测的影响，导致胆汁酸测定值增加。这些试剂中为了保证反应充分，往往含有胆酸钠成分或是一些脂类水解促进剂等，这些物质导致了样本胆汁酸测定的携带性增高及内源产物等副反应性增高； 
10.谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反应体系会干扰总胆汁酸检测中的Thio-NAD－Thio-NADH循环指示体系，导致测定值偏低；
由于各个试剂公司所提供的产品说明书常不能全面反映试剂的组成情况，所以通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰变得很重要。下面以两个试验来加以说明: 
A.将试剂作为样本进行全套项目测定，根据结果确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。  
B.将一份样本分为两份，一份加生理盐水或其他适当的稀释液，另一份加等量的试剂，同时测定、考察结果的变化，进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。进行这一实验时，使用半自动生化分析仪可能会得到更为理想的结果，尤其是针对双试剂反应时， R1、R2加入时机可以得到更为精确的控制。 
此外，由于试剂成分的复杂多样性，实时仪器状况的独特性，可能发生的试剂间的交叉污染的情况不尽相同。
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