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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
38
- 英文名:
NC
- 保质期:
详见说明书
- 供应商:
上海抚生
- 保存条件:
低温冷藏
- 规格:
详见说明书
硝酸纤维素薄膜
英文名称:NC;Nitroate cellulose sheets
其他名称:硝酸纤维素膜
规格:30×3cm/卷
性状(以下信息仅供参考):硝纤膜比较脆,又容易卷,操作要小心,不适合用于需要多次重复清洗的用途。选择硝纤膜时要注意的是选择合适的孔径,通常20KD以上的大分子蛋白用0.45um孔径的膜,小于20KD的话建议选择0.2um的,如果小于7KD的话最好选择0.1um的膜。另外还要注意选择纯的NC膜——混有含醋酸纤维(CM)的NC膜结合力会有所降低。由于NC膜上结合的蛋白会因为一些去污剂而被代替,因此在封闭时最好使用较温和的Tween20,而且浓度不要超过0.3%
用途:本品仅供科研,不得用于其它用途。(以下用途仅供参考)硝酸纤维素膜是蛋白印迹最广泛使用的转移介质,对蛋白有很强的结合能力,而且适用于各种显色方法,包括同位素,化学发光(Luminol类)、常规显色、染色和荧光显色;背景低,信噪比高。NC膜的使用也很简便,比如不需要甲醛预处理,只要在无离子水面浸润排出膜内气泡,再在电泳缓冲液中平衡几分钟就可以了;比如NC膜很容易封闭,也不需要特别严谨的清洗条件。转移到NC膜上的蛋白在合适的条件下可以稳定保存很长时间
保存:RT
硝酸纤维素薄膜试剂间的干扰原因:
试剂中含有下一测试所要测定的底物,或是含有的某种试剂成分与下一反应所要测定的底物有作用,因而直接干扰下一反应的测定结果;
该试剂所引导的反应对下一项目的反应进程带来了间接的干扰,因为在有试剂污染的情况下,下一项目所测定的是前后两个项目反应的综合作用结果。下面通过对试剂成分的分析和相应试验来找出试剂交叉污染可能带来的情况,进而指导相应的项目调整和结果分析
硝酸纤维素薄膜试剂间可能发生的干扰情况
1.ALT(IFCC)、AST(IFCC)试剂中含有高活力LD成分,有可能会对LD的测定带来干扰;
2.ALP(IFCC)、CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)、CO2(PEPC)、α-Amy(EPS)等试剂中使用缓冲液,可能会对其后的Mg2+ 测定带来干扰;
3.ChE(Butyrylthiocholine)、TC(ChOD-PAP)、Glu(GOD-PAP)、 UA(Uricase)、 α-HBDH(DGKC)等试剂使用缓冲液,可能会对无机磷的测定带来干扰;
4.CK(NAC-activated)、CK-MB(NAC-activated)试剂中含有Glu成分,其分析方法的原理中包含Glu的已糖激酶(HK)反应过程,因此可能对Glu测定带来干扰,尤其对Glu的HK法测定可能带来严重干扰;
5.Mg2+试剂 (Calmagite)中含有EGTA成分,为Ca2+络合剂,可能对Ca2+的测定带来干扰;
6.个别试剂以甘油做酶的保护剂,因此可能对TG的测定带来干扰,等等;
7.低密度脂蛋白、甘油三酯、胆固醇的试剂成分中都含有CE、CHOD、POD酶,都会与血清成分反应,生成的中间反应产物是H2O2浓度,因为低密度脂蛋白和甘油三酯检测单位都是mmol/L级,而尿酸检测单位是μmol/L级,二者之间相差1 000倍,故检测尿酸的反应杯中只要残留极少量的低密度脂蛋白和胆固醇试剂就可产生大量的H2O2,直接导致尿酸的检测结果的升高;
8.葡萄糖对尿酸试剂的干扰GLU(OX)与UA测定原理均采用Trider's反应方法,试剂探针残留携带的GLU带入到UA反应体系,发生血糖反应其产物红色醌亚胺与UA产物红色醌亚胺颜色叠加,而血清中正常血糖含量远高于尿酸水平,从而导致UA结果严重偏高;
9.胆固醇(TC)、甘油三醋(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL) 会对总胆汁酸检测的影响,导致胆汁酸测定值增加。这些试剂中为了保证反应充分,往往含有胆酸钠成分或是一些脂类水解促进剂等,这些物质导致了样本胆汁酸测定的携带性增高及内源产物等副反应性增高;
10.谷丙中的含有的酮戊二酸NADH反应体系会干扰总胆汁酸检测中的Thio-NAD-Thio-NADH循环指示体系,导致测定值偏低;
由于各个试剂公司所提供的产品说明书常不能全面反映试剂的组成情况,所以通过实验发现试剂交叉污染可能带来的干扰变得很重要。下面以两个试验来加以说明:
A.将试剂作为样本进行全套项目测定,根据结果确定发生试剂交叉污染时造成直接干扰的项目。
B.将一份样本分为两份,一份加生理盐水或其他适当的稀释液,另一份加等量的试剂,同时测定、考察结果的变化,进而确定可能发生试剂交叉污染时造成干扰的项目。进行这一实验时,使用半自动生化分析仪可能会得到更为理想的结果,尤其是针对双试剂反应时, R1、R2加入时机可以得到更为精确的控制。
此外,由于试剂成分的复杂多样性,实时仪器状况的独特性,可能发生的试剂间的交叉污染的情况不尽相同。
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文献和实验基于膜的检测试剂研发人员应该严格考虑影响蛋白质在硝酸纤维素膜上结合众多因素,其中包括原材料的固有属性和处理过程等。随着胶体金标记技术的发展、研发人员对胶体金快速检测技术深入研究,市场上基于膜的快速免疫层析检测产品的种类迅速增多。虽然免疫层析产品的包装设计种类繁多,实际上目前主流的商品化检测试剂盒主要下面两种形式。最常用的检测形式为侧向层析或者层析定量,这种检测形式通常应用于诊所或者由直销客户检测。另一种检测形式为竖向斑点渗滤,该检测形式需要较强的操作技巧,仅限于研究使用。不管试剂采用那种检测
[目的与原理] 掌握醋酸纤维素薄膜电泳原理及操作技术,利用该电泳技术分析和测定人或鱼血清中各种蛋白质相对百分含量。醋酸纤维素薄膜电泳(cellulose acetate membrance electrophoresis)以醋酸纤维薄膜为支持物。它是纤维素的醋酸酯,由纤维素的羟基经乙酰化而制成。它溶于丙酮等有机溶液中,即可涂布成均一细密的微孔薄膜,厚度以0.1mm—0.15mm为宜。太厚吸水性差,分离效果不好;太薄则膜片缺少应有的机械强度则易碎。本实验以醋酸纤维素为支持物,分离各种血清
电泳完毕后,可立即将乙醛酰RNA自琼脂糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜,有以下几种转移方法:毛细管洗脱法、真空转移法和电印迹法。毛细管洗脱法如下所述, 真空转移法和印迹法则按有关仪器生产厂家产品说明书进行。尽管有人认为在转移前对琼脂糖凝胶进行预处理实属不必(Thomas,1980)甚至有害(Thomas,1983), 但我们认为含甲醛的凝胶必须用经DEPC处理的水淋洗数次,除去甲醛。 如果琼脂糖中浓度大于1%或凝胶厚度大于0.5cm或待分析的RNA大于2.5kb,需用0.05mol/L
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