100×20mm细胞培养皿（标准 ）

小鼠肿瘤样本单细胞悬液的制备及注意事项

基或者 PBS 稀释，再用 200 目筛网，除去残留的组织块，并使用5~10倍体积的 1640 基础培养基或者 PBS 缓冲液洗涤一次，过滤至无组织块为止，获得单细胞悬液。 收集细胞悬液，300 g离心5 min，弃上清。 用细胞染色缓冲液重悬细胞，并调整细胞浓度至 1×107/mL。 研磨法 提前准备好 200 目的一次性细胞筛网，用 1640 基础培养基或者 PBS 润湿并浸泡备用（浸泡放置于 6 cm 细胞培养皿或者 6 孔板）。 将剥离的肿瘤组织转移到 200 目的细胞筛网，用无菌眼科

蛋白质印迹（Western blot）实验方案

5 分钟，并进行分装。在 -20 °C 下保存裂解物。注意：分装细胞裂解物 (50 - 100 μL)，避免反复冻融循环。4. 在 37 ℃ 下解冻装有细胞裂解物的离心管。在微型离心机中以 16,000 × g 离心 5 分钟。三、上样和电泳1. 将等量的蛋白质和分子量标准上样到 SDS-PAGE 凝胶孔中。来源于细胞裂解物或组织匀浆的总蛋白的上样量为 20 - 30 μg，纯化蛋白的上样量为 10 - 100 ng。2. 在 100 V 下电泳 1 至 2 小时。可能需要对时间和电压进行一些优化

手把手教你使用酸法提取组蛋白

自己需要的实验处理，处理结束后开始收蛋白，先用 1×PBS 将细胞洗两次，每次吸尽上清。2、每孔加入 200ul NETN 裂解液，冰上裂解 15min High salt NETN buffer母液配制 100ML20mM Tris,PH=8.01M2ml500mM NACL5M10ml0.5% NP-4020%2.5ml1mM EDTA0.5M200ulH2O85.3ML临用前加蛋白酶抑制剂3、用细胞刮刮细胞，将细胞收集于 1.5mlEP 管中，1500g,4℃，离心 10min4、离心