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标本溶血:
1、脱水、休克等疾病使得穿刺困难而溶血;
2、抽血器质量不合格导致溶血;
3、血清分离不当导致溶血;
4、红细胞有先天或获得性缺陷而易破坏溶血;
5、患溶血性疾病。
溶血的干扰机理:
1、血细胞中浓度远高于血清浓度:血细胞中高浓度物质溢出,测定结果偏高。如K、CK、LDH、AST等,轻度溶血即可有很大影响。
2、血细胞中浓度低于血清浓度:此时溶血相当于血清稀释而结果偏低。如血糖、r-GT等。
、检测大多是检测化学反应前后颜色变化程度来计算待检物浓度。血红蛋白的红颜色会造成干扰。
控制影响因素:
开展常规项目的室内质量控制,绘制质控图和观察室内环境;谨慎使用检测方法学;
在使用某一方法时,先虑标本量是否太少或血清凝固,需重新处理标本进行测定;如果是采用速率法,要考虑是否是酶活力过高;动态反应曲线是否正常,注意有无提示数据报警;
仪器方面,如果发现某一时间的结果全部偏低,就要考虑是否引入了系统误差,是否发生仪器的样品针堵塞,搅拌棒搅拌不均等情况,或样品针注射器漏气,或试剂的交叉污染,或光源灯老化等问题;避免标本的溶血或脂血现象。
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文献和实验RNA Purification Protocol for 100-200 mg of Animal Tissue
. Storage at -70°C. Fresh tissue can also be used. Work quickly and keep the sample on ice at all times. 2. Add 100-200 mg frozen ground tissue or fresh tissue to a 15 mL centrifuge tube containing 6 ml RCL Buffer. Homogenize the sample using 5-10
与 TritonX100 等细胞通透剂。 2. 蛋白酶K一般工作液浓度为 20 μg/ml,亦可自行将浓缩液配制1-10 mg/ml。蛋白酶K可用 PBS 配制,也可用蛋白酶K缓冲液(100 mM Tris HCl pH8.0, 50 mM EDTA),分装后-20ºC保存。 3. 蛋白酶K反应时间一般为10-30 min,具体时间长短与切片厚薄有关,4 μm左右的片子可以通透 10 min,如切片厚度30 μm左右的可延长至30 min,需实验摸索最佳时间。通透时间过长易脱片、过短起不到通透效果。 四
来源: 源于白色念球菌(Tritirachium album) 反应条件: 蛋白酶K在较广的缓冲液pH范围(pH 4-12.5), 温度范围(37-60℃), 盐浓度(如: 3 M GuHCl)或尿素(4 M)条件下均有活性。在一些去污剂如: Tween20(5%), Triton X-100 (1%)和SDS(1%)条件下也有活性 比活性: 30 units/mg
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