冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒

特别提示：包括冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒

产品货号：冰冻切片活性氧(ROS)检测试剂盒
产品规格：200T

活性氧(Reactive oxygen species,ROS) 包括过氧化氢(H2O2，Hydrogen peroxide)、羟基自由基(•OH，Hydroxyl radical)、单线态氧(1O2，Singlet oxygen)、一氧化*(NO，Nitric oxide)、超氧阴离子(•O2-，Superoxide anion)、过氧化自由基(ROO• ，Peroxyl radical)、过氧羟自由基(HOO• ，hydroperoxyl)及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子(ONOO-，Peroxynitrite anion)、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。
活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生主要是氧化磷酸化的结果，在呼吸链中，在某些位点会有“泄露”的电子直接和氧气或和其他电子受体反应，在酶或非酶作用下引发一系列反应生成不同种类的活性氧：“泄露”的电子最初和氧气反应生成超氧阴离子自由基(O2·-)。超氧阴离子遇水生成H2O2，同时过氧化氢也可由氧气在单胺氧化酶(monoamine oxidase,MAO)的作用下生成，生成的过氧化氢在髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的催化下与Cl-反应可生成ClO-，在铁或铜离子的催化下发生Fenton反应生成OH·，超氧阴离子遇氮氧化物反应生成ONOO-。这些生成的高氧化活性的物质统称为活性氧。
冰冻切片活性氧检测试剂盒是一种利用荧光探针DCFHDA进行活性氧检测的试剂盒。DCFHDA本身没有荧光，被活性氧特异性氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与活性氧水平成正比，检测绿色荧光就可以知道组织内活性氧的水平。
在激发波长500nm，发射波长525 nm附近，使用荧光显微镜/激光共聚焦检测绿色荧光，从而测定组织内活性氧水平。

储存条件：DCFHDA 探针-20℃避光保存；清洗液2-8℃保存。
有效期：一年。

※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。

注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。

产品特点：
● 使用方便：可用荧光显微镜直接观察；
● 背景低，灵敏度高；
●线性范围宽，使用方便。
检测方法：
荧光显微镜
激光共聚焦显微镜
样本类型：
● 新鲜冰冻切片
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
●荧光显微镜，激发波长500 ± 15 nm，发射波长525 ± 15 nm。
● 离心机 ● 移液器 ● 冰箱 ● 冰盒
耗材
● 离心管 ● 吸头
试剂
● PBS(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液)

使用方法：

使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
●对于某些样本，如果荧光太强，可以按照1:200-1:1000稀释探针。探针标记的时间也可以根据情况在20-60分钟内适当进行调整。
● 以下操作步骤仅供参考，请根据实际样本情况调整。
一、试剂配制
1．根据样本数，用纯水将DCFHDA活性氧荧光探针200倍稀释，配成染色工作液。
2．用纯水将10×清洗液10倍稀释，配成1×清洗液工作液。
二、探针标记
1．准备待测的厚为10μm的未经固定处理的冰冻切片。
【注】:
● 建议使用新鲜组织(手术切除后1小时内)制成的冰冻切片。
2．室温下，小心加上200μl清洗液工作液，铺满整个切片表面，静置5-10分钟。
3．小心吸除清洗液。
4．滴加100μl染色工作液，在37℃培养箱避光孵育20-60分钟。
【注】:
● 最好在湿盒中孵育，避免液体蒸发。
4．移除染色液。
5．用PBS洗涤切片2-3次。
6．加盖玻片或甘油封片。
7．荧光显微镜检测。
【注】:
●染色完成后，立即进行荧光定性分析。
● 激发波长488nm，发射波长525nm。
●荧光强，表明活性氧(ROS)含量高。

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