全蛋白提取试剂盒(中)

特别提示：包括全蛋白提取试剂盒(中)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：全蛋白提取试剂盒(中)
产品货号：QN1068
产品规格：50T|100T

全蛋白提取试剂盒(中)用于哺乳动物组织和细胞中提取总蛋白，试剂盒中的裂解液含有蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，作用较为温和，可快速获得总蛋白，可用于免疫印迹实验等基础研究实验，由于含有上述的酶抑制剂，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。

操作方法:
1、组织总蛋白的提取
(1)在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制剂、蛋白酶抑制剂和PMSF;混匀，放置在冰上备用;
(2)称取0.1g的新鲜组织，放置于玻璃匀浆器的入口缓冲处，用眼科剪将组织块尽可能的剪碎，然后加入0.5～1ml的新配置的裂解液，研磨直至没有明显的组织块，这个过程注意冰上操作;
(3)将组织匀浆液移入1.5ml的EP管中，4℃12000g离心30min;
(4)吸取上清至新的管中;
(5)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)
2、细胞总蛋白的提取
(1)裂解液的用量：107个细胞需要裂解液1ml;
(2)贴壁细胞：弃去培养基，用冷的PBS洗两次，弃去PBS，然后加入计算好的细胞裂解液;在冰上用细胞刮刀进行刮离细胞，将刮离的细胞裂解液移入EP管中，颠倒裂解20-30min
(3)悬浮细胞：4℃,400g离心收集细胞，用冷的PBS洗两次细胞，同样按细胞数加入裂解液，涡旋10s，放置冰上裂解10min，重复3～4次;
(4)裂解完毕之后，将细胞裂解液4℃12000g离心30min;
(5)将上清移入新的EP管中;
(6)进行蛋白定量或者变性进行蛋白实验。
(提取好的蛋白建议保存于-80℃，即用即取，避免反复冻融，避免长时间储存。)

注意事项：
1、实验过程，所有试剂都要需要预冷或者即融，保证操作过程中的低温环境;
2、PSMF(有毒)现用现加，因为PMSF在水溶液中会快速降解;

储存条件 ：-20℃

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