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脉络膜新生血管(choroidal neovascularization,CNV)已成为眼科学领域的研究热点之一,目前多数体外研究应用的是人脐静脉内皮细胞或主动脉内皮细胞等容易得到的大血管内皮细胞。由于血管内皮细胞具有器官特异性和组织特异性,用大血管内皮细胞的研究结果很难客观、准确地解释CNV的发生机制。因此,建立脉络膜微血管内皮细胞(choroidal microvascular endothelial cells,CEC)体外培养体系,对深入研究CNV相关疾病具有十分重要的价值。
细胞特性:
- 组织来源于实验动物的正常眼组织。
- 细胞鉴定:CD34、CD31免疫荧光染色为阳性。
- 经鉴定细胞纯度高于90%。
- 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
- 细胞生长方式:呈鹅卵石样,不规则细胞,贴壁培养。
产品的运输和保存:
视天气状况和运输距离远近,公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。
- 1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中,置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输;收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养,如无法立刻进行复苏操作,冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。
- T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输;收到细胞后请镜下观察细胞生长状态,如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作,如悬浮的细胞较多,请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。
推荐培养基:
我们推荐使用HX原代内皮细胞培养体系(产品编号:PriMed-HX-002)作为体外培养原代脉络膜微血管内皮细胞的培养基。
产品使用:
- 本产品仅能用于科研
- 本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
- 本产品未通过用于活体诊断的审核
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文献和实验的[5],但细胞得率均较低,而近些年来国外大多数方法采用以大脑皮质为材料、酶消化及梯度离心分离脑微血管段并进行原代培养[6~9,11,12]。由于原代培养中无法避免地混杂成纤维细胞、周细胞、平滑肌细胞、星型胶质细胞等其他细胞的生长,而且工作量大、过程繁琐且费用高[1],进行较纯的大鼠脑微血管内皮细胞原代培养一直是国内外的一个难点。 本人参照文献[6]、[7]、[8]的方法,成功地摸索出大鼠脑微血管内皮细胞分离和原代培养的方法,并获得纯度较高的脑微血管内皮细胞。 1.材料与方法 1.1 实验动物 每次
。 选用80克SD大鼠(雌雄不限,购自复旦大学实验动物部),1%戊巴比妥钠(1ml/100g)腹腔注射麻醉,75%酒精浸泡5min消毒,将大鼠移至超净台进行操作,止血钳固定四肢,逐层打开胸腔,暴露心脏,剪开心包,由升主动脉处剪下心脏,放入D-Hanks平衡盐缓冲液中.冲净心腔中的血液,辨清心脏解剖结构,去除大血管、左右心房以及右心室和室间隔,保留左心室,小心去除心内膜及心外膜,用眼科剪剪碎余下的心室肌约2mm见方,滴加1ml进口胎牛血清.均匀接种于处理过的50ml培养瓶中,放入37℃、5%CO2
绳活缚腿,背卧位绑在大鼠固定板上;尾静脉注射时的固定同小鼠(只需将固定架改为大鼠固定盒即可)。 3.豚鼠的抓取固定方法 豚鼠较为胆小易惊,不宜强烈刺激和受惊,所以在抓取时,必须稳、准和迅速。一般抓取方法是:先用手掌迅速扣住鼠背,抓住其肩胛上方,以拇指和食指环握颈部,另一只手托住臀部。固定的方式基本同大鼠。 4.兔的抓取固定方法 抓取:实验家兔多数饲养在笼内,所以抓取较为方便,一般以右手抓住兔颈部的毛皮提起,然后左手托其臀部或腹部,让其






