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XL10-Gold感受态细胞

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  • 北京
  • C1450
  • 2026年02月21日
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      -70℃保存,6 个月,避免反复冻融。不适合在液氮中保存。

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      C1450-20*100ulXL10-Gold感受态细胞分子生物学>重组克隆表达>感受态20×100ul/920.00索莱宝首页 (solarbio.com)

    • 供应商

      北京索莱宝科技有限公司

    • 规格

      20*100ul

    XL10-Gold 感受态细胞
    货号:C1450
    规格:20×100μL
    保存:-70℃保存,避免反复冻融。6 个月。不适合在液氮中保存。

    产品简介: 本公司生产的 XL10-Gold 感受态细胞是采用大肠杆菌 XL10 菌株经特殊工艺处理得到的感受态 细胞,可用于 DNA 的化学转化。适用于高效的 DNA 克隆和质粒扩增。能保证高拷贝质粒的稳定复 制。适合非甲基化 DNA 的转化。使用 pUC19 质粒检测,转化效率可达 10 8 cfu/µg。

    基因型: Tet rΔ(mcrA)183Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)173endA1supE44thi-1recA1gyrA96relA1lacHte[F′proABlacI qZΔM 15Tn1 0(Tet r) AmyCamr]

    抗生素耐药性:细胞具有四环素和氯霉素抗性。

    操作方法:(以下操作均按无菌条件的标准进行)
    1. 取感受态细胞置于冰浴中。
    2. 向感受态细胞悬液中加入目的 DNA ( 100μl 的感受态细胞能够被 1ng 超螺旋质粒 DNA 所饱和), 轻轻旋转离心管以混匀内容物,在冰浴中静置 30 分钟。
    3. 将离心管置于 42℃水浴中放置 60 秒钟,然后快速将管转移到冰浴中,使细胞冷却 2 分钟,该过 程不要摇动离心管。
    4. 向每个离心管中加入 500μL 无菌的 SOC 或 LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃ 150rpm, 摇床振荡培养 60 分钟,目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
    5. 无菌条件下,取适量菌液加到含相应抗生素的 LB 固体培养基平板上,用无菌的细菌涂布器或玻 璃珠将细胞均匀涂开。等平板中的液体完全吸收后,倒置平板,37℃培养 12-16 小时。
    6. 保留剩余的菌液于 4℃冰箱中,视平板上菌落生长情况决定去留。

    注意事项:
    1.感受态细胞应保存在-70℃,不可反复冻融,否则其转化效率将会降低。
    2.实验过程中应严格无菌操作,防止其它 DNA 或杂菌的污染,避免为以后的筛选、鉴定带来影响。
    3.转化时,转化效率与外源 DNA 的浓度在一定范围内成正比,但当加入的外源 DNA 量过多或体 积过大反而会降低转化效率。转化时 DNA 体积要小于感受态细胞体积的十分之一。
    4.转化率的计算:转化率=产生菌落的总数/铺板 DNA 总量。
    5.为防止转化实验不成功,可以保留部分连接产物,以重新转化,将损失降到最低。

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