10ul加长盒装滤芯吸头,低吸附45.7mm

【资源】蛋白纯化经验指南（）

道谁对！ ^_^ 45) 我是需要在兔肝中纯化一种酶,而且我是刚刚接触蛋白纯化我有几个问题想请教: 1 : 我的目的蛋白在强阴离子柱上结合(buffer : 25 mM 磷酸盐 PH 7.4),但是似乎结合力很弱(因为上样时就有少量蛋白flowthrough,而且洗脱峰在电导值刚开始升高时就开始出现了),我换用了20mM Tris PH 8.2 buffer 之后,蛋白的结合力好像还是很弱,洗脱峰没多大改变.请问我用 PH 8.5 Tris buffer 会改善我的问题么? 2: 由于目的蛋白丰度低易失活

蛋白纯化经验指南

，这样它的内孔和没有干扰的排阻极限也不同，所以分离效果自然比没有干扰要差。特别是压缩会使孔变得不均匀。 当然相对而言，前面的原因是最主要的，后面是次要的。 其实不仅是凝胶过滤，别的色谱有这两物质（还有一些脂溶性的物质）也会一样干扰传质，因此影响分离效果。所以这两个东西一般要小心，同时它还会降低柱子的寿命。 23）我的目的蛋白是以可溶形式表达，MW=６KD，理论等电点为9.45．，无tag．我先用S-100除去了部分杂蛋白，但接着再用阳离子交换柱SP分离（２０mM PB ph=7.00），发现目的