YF®594-EdU通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光）

YF®594 Click-iT EdU 通用款细胞增殖检测试剂盒（红色荧光）
推荐仪器：荧光显微镜、流式细胞仪
产品概述：
产品内容

组分 规格	20T	100T	500T	1000T	开封后保存温度	稳定性
A. 10 mM EdU	40 µL	200 µL	1 mL	2× 1 mL	-20℃	开封后按指定温度保存可有效放置一年
B. YF® 488/555/594/647A Azide	10 µL	50 µL	250 µL	500 µL	-20℃，避光
C. 10× Click-iT EdU反应缓冲液	200 µL	1 mL	5 mL	10 mL	2-8℃
D. CuSO4	100 µL	500 µL	2× 1.25 mL	5 mL	2-8℃
E. Click-iT EdU缓冲液添加物	6 mg	30 mg	150 mg	2 × 150 mg	2-8℃
F. Hoechst 33342	5 µL	25 µL	125 µL	250 µL	2-8℃

规格：上述反应次数针对96孔板培养的细胞。
荧光光谱数据：YF^® 488 Azide：495/519 nm；YF^® 555 Azide：555/565 nm；YF^®594 Azide：590/617 nm
YF^® 647A Azide：650/670 nm；Hoechst 33342：350/461 nm（bound to DNA）

储存条件
-20℃避光保存，有效期见外包装。开封后，保存温度详见说明书。

产品介绍
细胞增殖检测是评估细胞健康程度、遗传毒性及抗肿瘤药物效果的基础实验手段。检测细胞增殖最精确的方法是 BrdU法。EdU法检测试剂盒是BrdU法的革命性突破。EdU（5-乙炔基-2’-脱氧尿苷）是一种嘧啶类似物，在DNA合成 期整合入DNA双链。EdU法检测基于“点击”反应，一种由铜催化的叠氮化合物和炔烃作用发生共价反应，形成共价键。
本试剂盒中，EdU含有炔烃，YF^® 488/555/594/647A Azide染料含有叠氮化合物。点击法的EdU标记增殖快速有效，易于使用。BrdU方法需要DNA变性（如酸变性、热变性或者用DNase消化）暴露出BrdU，从而方便BrdU抗体结 合；而EdU法只需标准化的多甲醛固定和Triton X-100促渗就可以使检测试剂进入细胞，只需少量的叠氮化染料即可非常有效地标记出整合的EdU。
本试剂盒包含EdU法检测所需要的所有组分，可以用于体外培养细胞的增殖检测。
常见问题解答：

◆YF®488/555/594/647有什么区别？

主要就是检测EDU的物质带的荧光基团不同，检测时发射荧光的颜色不同。实验效果相同，可根据偏好或需求进行选择。

◆EdU试剂盒中，固定后3% BSA in PBS的作用是什么？
清洗步骤中，BSA可以终止掉未反应的甲醛。

◆能否在活细胞中进行Click-iT EdU检测？
不可以。虽然EdU是对活细胞进行代谢标记，但是叠氮化物检测试剂和缓冲液组分是细胞非透过型，检测信号时的Click反应必须在固定和通透的样品上进行。

◆质粒转染表达的荧光蛋白检测与Click反应兼容吗？检测顺序是什么？
本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，故染色后无法直接检测GFP，建议使用GFP抗体间接检测。

◆观测到较高的本底干扰，这是什么原因所致？如何减少本底干扰？
叠氮化物和炔烃类间Click反应非常有选择性，生物体内几乎不可能有副反应发生，所以本底较高一般是由洗涤不充分造成的。减少本底干扰的最佳方法是增加BSA洗涤的次数。同时，也可在同样的检测条件下设置一组同等处理的无染料或无Click反应对照，以排除自发荧光干扰。此外，您还可在无EdU 体系中进行完整的Click反应，验证Click反应信号的特异性。

◆为什么标记样品无信号或特异性信号非常低？如何提高信号？
1.请保证试剂使用时为无色的状态，不要使用已经变黄的添加剂或缓冲液；
2.为确保Click反应试剂能够到达核内，细胞需要充分地固定和通透；
3.由于铜离子能结合到部分试剂上，这会导致催化Click反应的有效浓度降低。所以在Click反应前，不要在任何缓冲液或试剂中引入金属螯合剂（例如EDTA、EGTA、柠檬酸盐等），对某些含有这些物质的实验样品来说，进行Click反应前，可能需要增加额外的洗涤步骤；
4.当铜离子在合适的化合价时，Click反应才有效。Click反应中用到的铜离子为二价铜(Cu2+)。
5.延长Click反应的时间至超过30分钟也并不会提高信号。建议使用新鲜的Click反应试剂再次进行30分钟的孵育，可更有效地提高标记效率。

◆如何对细胞核进行复染？
试剂盒中配有Hoechst 33342，可以在Click反应后用于细胞核的染色，也可选择使用DAPI。

◆可以用于检测植物细胞核内的DNA复制吗?
可以。EdU是小分子，可以穿透植物细胞的细胞壁。