Helixyte Green双链DNA定量试剂

分析方案

以下方案是使用Helixyte Green 定量dsDNA的实例。 在打开样品瓶之前，让Helixyte Green 温热至室温。

注意：没有数据可用于解决Helixyte Green dsDNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合，所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理，并进行适当的处理。 应特别小心处理DMSO储备溶液，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。

1.准备Helixyte Green 工作解决方案：

1.1通过在TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 7.5-8.0）中浓缩DMSO溶液200倍稀释，制备Helixyte Green的水性工作溶液。 例如，将50μLHelixyteGreen添加至10 mL TE，以制备足够的工作溶液，以在200μL终体积中测定100个样品。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。

注1：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。

注2：为获得佳结果，该溶液应在制备后几小时内使用。

2.准备dsDNA标准品的连续稀释液（0至3 ng / mL）：

2.1在ddH2O中制备1mg / mL的dsDNA原液（如来自Sigma的小牛胸腺DNA）。

2.2将10μL1mg / mL dsDNA原液（步骤2.1）加入到998 L TE缓冲液中，得到10μg/ mL dsDNA溶液，然后进行1:10和1：2连续稀释，得到1000,100,50,25 ，12.5,6.25,3.125和0 ng / mL。

2.3如说明书中的表1和2中所述，将dsDNA标准品和含有测试样品的DNA添加到96孔固体黑色微孔板中。

3.运行dsDNA测定：

3.1将100μLdsDNA测定混合物（来自步骤1.1）添加至dsDNA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤2.3）以使总dsDNA测定体积为200μL/孔。

注1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLdsDNA测定混合物。

注2：对于基于曲线的测定，每曲线添加1mL样品和1mL dsDNA测定混合物。

3.2在室温下孵育反应5至10分钟，避光。

3.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）观察荧光增加。

3.4空白孔中的荧光（仅含TE缓冲液）用作对照，并从具有dsDNA反应的那些孔的值中减去。 从DNA标准曲线中产生的标准曲线确定样品的DNA浓度。