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广州益满生物科技有限公司
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文献和实验ATP 释放因子,室温中反应 5 分钟。取另一块 96 孔细胞培养板,从第一块板的各孔中吸 0.1ml 细胞溶解物到第二块板的相应各孔。 3. 在低于 25 ℃中,将第二块板置自动多孔荧光检测仪中。用自动加样器,每孔加入 20 μ l ATP 反应液,立即检测 10 秒钟的荧光强度。温度升高,检测敏感性就下降。 4. 用 RLU ( Y 轴)对细胞因子标准品的稀释度( X 轴)作标准曲线,根据标准曲线确定待测样品中细胞因子的含量。
地关注。 原理: ATP含量检测可以用吸光度检测、发光检测或同位素等方法实现。传统的吸光度检测法,检测灵敏度低,线性范围窄,难以准确检测ATP状况。而应用荧光素酶发光方法检测ATP,具有极高的灵敏度和极宽的检测范围,而且简便、快速,是目前最为流行的方法。该方法基于萤火虫荧光素酶(Firefly Luciferase)催化荧光素氧化,消耗ATP,发出光子的高效发光反应,具有发光效率极高、发光量与ATP含量呈很好的线性关系的特点。 检测方法: 1.所需器材 专用检测仪
和其它甲虫荧光素酶是分子量相对较大的酶,分子量大小约为 60kDa,底物为 D-荧光素,需要辅助因子 ATP 和 Mg2+。FLuc 发出的是黄红光,发射光峰值为 560nm。 海肾荧光素酶(RLuc)是一种从 Renilla reniformis 分离的分子量大小为 36 kDa 的荧光素酶。与 FLuc 相比,海肾荧光素酶的底物和辅助因子需求不同。RLuc 在氧气存在下催化腔肠素,产生 480 nm 的蓝光。海肾萤光素酶因其与 FLuc 在底物要求和光输出方面的差异而可用于双重报告检测。 近年
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