荧光定量0.1ml四排管

荧光定量PCR详细流程和问题解析（四）

大家都知道进行绝对定量需要标准曲线，有些用户认为进行相对定量时就不需要标准曲线了，可以通过 2-ΔC'T来计算，但这一计算是有条件的，即所有荧光定量PCR扩增的效率都接近于100%，可以通过实验来证明。但大多数用户并没有进行这样的实验就直接用 2-ΔC'T 来计算了。这是错误的，会得到错误结论。无论是使用自配的试剂还是用商业的荧光定量试剂盒，最好买够试剂，以免进行预实验或正式实验时没有试剂而必需采用其他试剂，由于不同试剂的缓冲液成份有较大差别，如有的试剂中含有DMSO及Mg2+离子等，可能会

荧光定量 PCR 异常扩增曲线分析攻略

Biosystems™ 系列荧光定量 PCR 仪加热模块分 0.2 ml 跟 0.1 ml 两种，实验前一定要确定自己的仪器是哪一种加热模块，再来选择对应的耗材。如果 0.1 ml 加热模块用成 0.2 ml 耗材，则会造成耗材压扁，甚至造成机器故障；如果 0.2 ml 加热模块用成 0.1 ml 耗材，则会造成反应管的外壁和荧光定量 PCR 仪器的温控模块没有充分接触，从而出现热传导不充分，进而影响酶的活性，会引起重复性不好（图四），或者溶解曲线多峰（非特异扩增），甚至是假阴性结果； 图四：耗材规格跟加热

定量PCR简介

PCR反应通过变性、退火、延伸三个循环步骤，使目标DNA片段曾指数扩增。 因此，PCR系统是一个极其灵敏的信号放大系统，能将极微弱、甚至是单拷贝的基因信号检测出来。 但是常规的PCR不能反映起始样本中目的基因的含量水平，从而限制了它在临床检测中的应用。 荧光定量PCR是指通过实时监控PCR体系中的荧光信号，对样本中初始模板进行定量分析的一项新技术。定量PCR可实时检测产物量，通过加入已知浓度的标准样品绘制标准曲线，然后根