β葡糖基转移酶(T4噬菌体)

特别提示：包括β葡糖基转移酶(T4噬菌体)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：β葡糖基转移酶(T4噬菌体)
产品规格：500U

  本品能特异性地将尿嘧啶二磷酸葡萄糖(UDP-Glc)的葡萄糖单元转移至双链DNA的5-羟甲基胞嘧啶残基上，形成β-葡糖基-5-羟甲基胞嘧啶。T4噬菌体beta葡萄糖转移酶通过克隆了T4噬菌体bgt基因的重组大肠杆菌获得。
  本品对5-hmC残基的定向修饰来区分5-mC和5-hmC。这种酶可以将所有5-hmC糖基化，产生5-ghmC。这个反应是序 列无关的，因此所有5-hmC都将糖基化，而C或5-mC则不受影响。

产品用途：
1、糖基化DNA中5-羟甲基胞嘧啶。
2、免疫检测DNA中5-羟甲基胞嘧啶。
3、通过与[3H]或[14C]-UDP-葡萄糖一起孵育将[3H]或[14C]-葡萄糖掺入到含有5-羟甲基胞嘧啶的DNA受体中，对5-羟甲基胞嘧啶残基标记。
4、通过核酸内切酶保护分析检测DNA中的5-羟甲基胞嘧啶。

基因组DNA中5-羟甲基胞嘧啶分析：

方案一
第1步：糖基化
基因组DNA用T4-BGT处理，让所有5-hmC糖基化，产生5-ghmC。这个反应是序列无关的，因此所有5-hmC都 将糖基化，未修饰或5-mC DNA则不受影响。
第2步：限制性内切酶消化
MspI和HpaII识别相同的序列（CCGG），但是对不同的甲基化状态敏感。HpaII只切割完全未修饰的位 点，胞嘧啶上的任何修饰（5-mC、5-hmC或5-ghmC）都阻碍切割。MspI则识别并切割5-mC和5-hmC，5-ghmC除外。
第3步：PCR分析
用引物扩增实验的靶DNA和对照的靶DNA。如果CpG位点含有5-羟甲基胞嘧啶，那么糖基化和消化之后检测 到条带，但是未糖基化的对照反应中没有。如果使用实时定量PCR，那么就可以估计这个位点大概有多少 羟甲基胞嘧啶。

方案二
TAB-Seq*


质量保证：经多次柱纯化，SDS-PAGE胶检测仅可见清晰单一的目的条带；PCR方法检测无大肠杆菌DNA残留，无核酸内、外切酶污染。

活性定义：1 单位指能够保护 0.5 μg T4 bgt-DNA 免受 MfeI 限制性内切酶切割所需要的酶量。

10×反应缓冲液：50 mM Potassium Acetate，20 mM Tris- acetate，10 mM Magnesium Acetate，1 mM DTT， pH 7.9 at 25℃

贮存缓冲液：20 mM KPO4，200 mM NaCl，0.25 mM DTT，0.1 mM EDTA，50% Glycerol，pH 7.0 at 25℃

热失活：65℃，20分钟。