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312
- 英文名:
Dam Methyltransferase
- 保质期:
一年
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别声明:本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品,严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。
百奥莱博专业生产供应Dam甲基转移酶厂家直销,我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂,价格优惠,欢迎广大科研工作者垂询订购。
名称:Dam甲基转移酶厂家直销
编号:BTN120505
规格:500U
英文名:Dam Methyltransferase
品牌:百奥莱博
产地:北京
Dam甲基转移酶能对序列
中的腺嘌呤(N6)进行甲基化。
产品组成:
| 成份 | 规格 |
| Dam甲基转移酶(8U/μL) | 62.5μL |
| 10×Buffer | 1mL |
| 使用手册 | 1份 |
活性定义:1单位指在10μl反应体系中,37℃条件下,1小时能保护1μg λDNA不被Mbol限制性内切酶切割所需要的酶量。
储存条件:低温运输,-20℃保存,有效期一年。
欲咨询购买Dam甲基转移酶厂家直销,请致电北京百奥莱博科技有限公司,为您提供最全面周到的产品服务,除此之外,我公司正在促销以下产品:
·PAGE胶miRNA柱式回收试剂盒
编号:BTN80203
英文名称:miRNA column recovery kit for PAGE gel
规格:50次
本试剂盒是miRNA聚丙*(代"烯")酰胺凝胶回收产miRNArc(BTN70604)的柱式升级产品,可用于回收200nt以下的小片段RNA,尤其是20nt左右的microRNA(miRNA)分子。
产品特点:
1.可以回收15-3000nt 范围内的各种长度的RNA,包括 100nt以下的miRNA片段。
2. 柱式回收法,比沉淀法更见简单快捷。
3. miRNA 回收率在 70%左右。
4.一站式,即开即用,操作简单,用户不需要自备任何试剂。
5.扩容性好,可小规模操作,也可以大规模操作。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 15ml |
| 溶液B | 15ml |
| 溶液C | 15ml |
| 溶液D | 40ml |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50ml |
| RNA 洗脱液 | 10ml |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输,4℃保存(RNA 洗脱液最好 4℃保存),有效期一年。
使用方法:
1. 切取含 miRNA片段的PAGE凝胶(100mg左右,尽可能多地把多余的胶切除,否则会影响回收效率),放入1.5mL塑料离心管中,用移液枪头尽可能将其捣碎(最好先在酒精灯上将枪头的口烧密闭再用于捣碎),捣得越细越好。
2. 加入300μL溶液A。
3. 将离心管水平放置并室温摇晃3小时以让 miRNA从 PAGE凝胶中扩散出来。如果回收的RNA片段长度超过100nt,摇晃时间应适当延长。提高温度到45-65℃,RNA扩散速度会增加。
4. 12000~15000g室温离心 1-2分钟,将含RNA的上清液转移到一个新的5mL的塑料离心管中。
5. 加入300μL溶液B、300μL溶液C和750μL溶液D混合均匀将离心管中的溶液分两次转移到离心吸附柱中,每次转移后都先静置3分钟,然后再12000~15000g离心1分钟,倒掉收集管中的液体。
6. 加入700μL通用洗柱液于离心吸附柱中。12000~15000g离心1分钟,倒弃收集管中的废液。
7. 12000~15000g离心半分钟以去除离心吸附柱中的残留液体。
8. 将离心吸附柱置于一新的干净的离心管(自备)中,加入25-50μL RNA洗脱液,静置3分钟。
9. 12000~15000g离心1分钟,离心管底部所得溶液即为纯化的miRNA溶液,可立即用于后续实验或者放冰箱长期保存。
10.可以PAGE电泳检查回收效率,最好使用百奥莱博的高灵敏的超快核酸银染试剂(BTN81104)染色以节约miRNA样品的用量。
Dam甲基转移酶厂家直销关键词:Dam Methyltransferase,Dam甲基转移酶,BTN120505
SV1273 TriDye 1 kb DNA Ladder
YT131 Annexin V-FITC细胞凋亡检测试剂盒 Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit
KFS216 Bax蛋白检测试剂盒 Bax Detection Assay(Western Blot)
SY0456 牛血清白蛋白(低内毒素) BSA, Low Endotoxin
SV0368 FauI限制性内切酶 FauI Restriction Endonuclease
WE0123 高效热启动DNA聚合酶 SuperStar DNA Polymerase
HR0364 蛋白提取定量PAGE电泳试剂盒 Protein extraction kit for quantitative PAGE electrophoresis
SY0094 AR-Luc荧光素酶报告基因质粒 AR luciferase reporter plasmid
BTN131280 Zetterqvist固定液 Zetterqvist Fixative Solution
BTN100942 单孢子全基因组扩增试剂盒 Single Spore Whole Genome Amplification Kit
SV1643 CLIP-Surface 启动试剂盒
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BTN131123 考马斯亮蓝G-250 Coomassie Blue G-250
BTN130971 柱式病毒RNA-DNA共提试剂盒 Virus RNA and DNA column extraction kit
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YT031 生物素标记DNA探针制备试剂盒(随机引物法) Biotin Random Prime DNA Labeling Kit)
BTN90602B DNA marker(pBR322/MspI) DNA ladder(pBR322/MspI)
SY0342 30%丙*(代"烯")酰胺/甲叉双丙*(代"烯")酰胺,19:1 30% Acryl/Bis Solution, 19:1
Dam甲基转移酶厂家直销关键词:Dam Methyltransferase,Dam甲基转移酶,BTN120505
·5M异硫*酸胍溶液(RNase-free)
编号:BTN100883
规格:250mL
·ECD-G固定液
编号:BTN131294
英文名称:ECD-G Fixative Solution
规格:250mL
本产品为碳二亚酰胺、戊二醛等组成的混合固定液。常用于多肽类激素的固定,对酶等蛋白质的固定也有良好效果。ECD(1-(3-二甲*基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐*(代"酸")盐)单独应用时,边缘固定效应重,但与戊二醛、Tris及PB联合应用,效果明显改善,细胞质仍可渗透,利用细胞中抗原的定位,超微结构保存较好。ECD-G固定液是一种用于培养细胞电镜水平免疫细胞化学研究的很好的固定剂。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
·1M Tris-HCl(pH9.0)(DNA级)
编号:BTN101208
英文名称:ECD-G Fixative Solution
规格:250mL
本产品为碳二亚酰胺、戊二醛等组成的混合固定液。常用于多肽类激素的固定,对酶等蛋白质的固定也有良好效果。ECD(1-(3-二甲*基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐*(代"酸")盐)单独应用时,边缘固定效应重,但与戊二醛、Tris及PB联合应用,效果明显改善,细胞质仍可渗透,利用细胞中抗原的定位,超微结构保存较好。ECD-G固定液是一种用于培养细胞电镜水平免疫细胞化学研究的很好的固定剂。
储存条件:常温运输,4℃保存,有效期一年。
·电泳级尿素
编号:BTN100873
英文名称:Urea
规格:100g
本产品是电泳级尿素干粉,专门用于尿素-PAGE胶的制备。PAGE电泳中尿素的作用是增加膜蛋白的溶解度,抑制核酸样品核苷酸碱基配对,使其迁移率与核酸序列和碱基组成无关,此外它还能提高多肽在SDS PAGE中的分辨率。它主要用于下列实验:
1. 核酸的尿素-PAGE变性电泳。
2. 多肽的SDS-PAGE电泳。
3. 膜蛋白的SDS-PAGE电泳
储存条件:常温运输及保存,有效期两年。
·甲基化专一性PCR试剂盒
编号:BTN100923
英文名称:Methylation Specific PCR Kit
规格:50次
本产品是基于PCR的甲基化DNA检测试剂盒(即MSP试剂盒)。它由两个成分组成,一个是亚硫*(代"酸")*盐试剂盒,用于将DNA中所有没有甲基化的C转化成U,而甲基化的C不变。二是优化的PCR试剂盒,利用客户自备的专一性引物,根据PCR来检测甲基化位点的位置。
产品特点:
1.本产品是亚硫*(代"酸")盐修饰试剂盒和即用型PCR 3.0的整合,即开即用,非常方便。
2.柱式DNA回收方法极大提高亚硫*(代"酸")盐修饰后DNA的回收率。
3.优化的PCR mix,含有PCR所需要的所有成分,减少了操作误差。
4.PCR结束后可以直接上样电泳,非常方便。
5.用户需要自备MSP专一性引物。
试剂盒组成:
| 成分 | 规格 |
| 溶液A | 5ml |
| 溶液B成分一(干粉) | 2.3g×5瓶 |
| 溶液B成分二(干粉) | 110mg×5瓶 |
| 通用溶胶液 | 50mL×2 |
| 离心吸附柱 | 50套×2 |
| 通用洗柱液 | 100mL |
| DNA洗脱液 | 10mL |
| PCR MagicMix 3.0 | 1.5mL |
| 说明书 | 1份 |
储存条件:常温运输和保存(PCR MagicMix 3.0要低温运输,-20℃保存),有效期一年。
自备试剂:超纯水、MSP引物、对照DNA模板和引物。
注:严格的实验一般要求下列5种对照DNA模板和相应的引物对,用户可以根据自身实验的要求只做其中的部分。
| 对照名称 | 起始DNA | 处理 |
| 未修饰未甲基化DNA对照 | 未甲基化DNA (无甲基化宿主菌或体外扩增而得) |
未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
| 已修饰未甲基化DNA对照 | 未甲基化DNA(同上) | 经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
| 未修饰甲基化DNA对照 | 甲基化DNA (用甲基化酶修饰未甲基化DNA而得) |
未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
| 已修饰甲基化DNA对照 | 甲基化DNA(同上) | 经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
| 未修饰样品DNA对照 | 样品DNA | 未经过亚硫*(代"酸")*盐修饰 |
使用方法:
Ⅰ.亚硫*(代"酸")*盐修饰
一、准备试剂
1.配制溶液B成分一溶液:加5.0mL超纯水和27μl溶液A到装有溶液B成分一干粉的棕色塑料瓶中,轻柔摇晃至溶(尽量少的剧烈摇晃,约需要5分钟),总体积约5.5mL。
2.配制溶液B成分二溶液:加10mL超纯水到装有溶液B成分二干粉的棕色塑料瓶中,轻柔摇晃混匀(尽量少的剧烈摇晃)。
3.配制溶液B工作液:将55μL溶液B成分二溶液加入到溶液B成分一溶液中,轻柔颠倒混匀即可使用。一瓶溶液B工作液可以用10次。
二、DNA变性处理
1.将5μL溶液A加入到45μL DNA溶液中并吹打混匀(总体积没有45μL需要用水补足到45μL,DNA总量在0.2-5μg之间,不能超过 5μg,一般使用2μg DNA即可)。 注意:DNA必须是线状的,长度最好在20-50 Kb左右。基因组DNA可以预先用酶切处理(酶的位点不得在研究的DNA序列之内),也可以用机械打断法处理(得到的DNA一般在20-50 Kb左右)。
2.37℃放置15分钟使DNA充分变性。
3.立即在DNA溶液中加入500μl溶液B工作液,轻柔颠倒混匀。
4.55℃避光保温8-16小时。如果使用水浴或没有热盖的PCR仪器保温,最好加50-100μL石蜡油,避免水分蒸发。
注意:必须避光保温。55℃处理8小时足以使95%的C变成U,保温时间过长会引起DNA的断裂。如果有的区域的C难以转化成U,可以改用两步式PCR处理(每55℃保温3小时后95℃变性处理5分钟,共5-10个循环),效果会更佳。
5.冰浴10分钟。
6.加入1mL的通用溶胶液,颠倒混匀后取一半溶液上柱。单链DNA会结合在离心吸附柱上,亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
7.12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。
8.取另一半溶液再上柱,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上,亚硫*(代"酸")*盐等将穿透过柱。
9.加入0.7mL通用洗柱液,12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。此步可以洗涤残留的亚硫*(代"酸")*盐。
10.干甩半分钟后,将离心吸附柱转移到一个新的离心管中,加入50μl新鲜配制的溶液A稀释液(5μl的溶液A原液与45μl的超纯水混合而得),室温放置2分钟后离心半分钟。
11.将洗脱下来的DNA溶液放置在37℃保温15分钟。
12.加入0.7mL的通用溶胶液,混匀后上柱。
13.12000rpm室温离心半分钟,弃穿透液。单链DNA会结合在离心吸附柱上,杂质等将穿透过柱。
14.干甩半分钟后,将离心吸附柱转移到一个新的离心管中,加入50μl DNA洗脱液,室温放置2分钟后离心半分钟。
15.所得溶液即为亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA,可以用于下面的甲基化专一PCR。
说明:此方法的回收率一般为50%,2μg DNA最后可以得到1μg的修饰后的DNA。由于修饰后的DNA呈长短不一的单链,EB染色效果很差,所以不能用灵敏度低的琼脂糖电泳-EB染色的方法检测,但可以用灵敏度更高的PAGE-银染方法检测。
Ⅱ.甲基化专一性PCR(以60μL的标准PCR反应体系为例)
1.在一干净的PCR管中,加入下列成分(冰上操作):
| 成分 | 样品管 | 对照管 |
| PCR MagicMix 3.0 | 30μl | 30μl |
| 亚硫*(代"酸")*盐修饰的DNA模板 | 100-500ng | 无 |
| 对照DNA模板 | 无 | 100-500ng |
| 自备MSP引物F | 25pmol | 无 |
| 自备MSP引物R | 25pmol | 无 |
| 对照模板专一性PCR引物F | 无 | 25pmol |
| 对照模板专一性PCR引物R | 无 | 25pmol |
| 补水到 | 60μl | 60μl |
注:有5种对照DNA模板可以供用户根据自身需要选择,详见自备试剂栏。
2.将混合物混匀,放入PCR仪中进行热启动PCR,结束后取5-10μL PCR产品直接进行琼脂糖电泳。
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