pUC18/MspI(34～501bp)

特别提示：包括pUC18/MspI(34～501bp)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：pUC18/MspI(34～501bp)
产品货号：RFT025
产品规格：20T(10μg/40μl)|50T(25μg/100μl)

本产品是由pUC18质粒经MspI完全酶切得到的，包括501，489，404，353，242，190，147，110，89，67，34bp DNA片段，适用于琼脂糖或聚*烯酰胺凝胶电泳中DNA条带的分析。本产品为浓缩型，配有6×DNA loading buffer，使用时按照比例配制即可。



使用方法：
1. 取2μl(0.5μg)DNA加1μl 6×DNA loading buffer，3μl去离子水混匀。取2-5μl混匀品加入到琼脂糖凝胶或聚*烯酰胺凝胶的加样孔中(每1mm×1mm加样孔加1μl，如果加样孔宽于5mm，可以适当增加上样量)就行电泳。
注：不建议用于变性聚*烯酰胺凝胶电泳。
2. 建议电泳条件为2.5-3.0％的琼脂糖凝胶，电压4-10 v/cm，凝胶长度7cm；或5.0-8.0％的聚*烯酰胺凝胶，电压10 v/cm，凝胶长度15cm。
3. 通过EB染色后紫外灯下观察条带。
注：如果对聚*烯酰胺凝胶进行银染，由于灵敏度较高，请适当降低Marker的上样量。

注意事项：
1. 凝胶介质的质量对DNA的电泳有很大影响，电泳时请尽量使用质量优等的琼脂糖和丙稀酰胺。
2. 请使用新鲜配制的电泳缓冲液和新鲜配制的凝胶进行电泳，以保证Marker良好的分离效果。

储存条件：-20℃，有效期1年。

除了pUC18/MspI(34～501bp),，我公司还供应以下相关产品：



名称：一站式DNA尿素-PAGE电泳套装
货号：BTN90317
规格：30次
本品是专门用于DNA 尿素-PAGE电泳的一站式试剂盒。

产品特点：
1.一站式，即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。用户不需要单独准备各种成分。
2.可用于DNA 测序、AFLP、DDRT、TGGE和RNase 保护实验等。
3. 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品*烯酰胺。
4.电泳后可直接用于银染、EB染色等实验。

产品组成：

成分	规格	保存
电泳级尿素	210g	常温
电泳级*烯酰胺	77.34g	常温
电泳级甲叉双*烯酰胺	2.67g	常温
10×TBE电泳液	250ml	常温
电泳级TEMED	1.5ml	4℃，避光
电泳级过硫酸*	1g	常温
2×尿素-PAGE上样液	1ml	-20℃
说明书	1份

储存条件：常温运输，保存条件见上表，有效期一年。

使用方法：

一、PAGE浓度和交联度的选择指南
尿素-PAGE一般推荐用29：1(*烯酰胺：甲叉双*烯酰胺)的交联度，
在此条件下，DNA片段和zuì适PAGE浓度对应关系如下：

单链DNA长度	zuì佳PAGE浓度	二甲*青FF迁移率 对应的长度	溴酚蓝的迁移率 对应的长度
50-400nt	8%	160nt	45nt
200-1000nt	5%	260nt	65nt
750-2000nt	3.5%	460nt	100nt

二、制备尿素-PAGE胶
1. 配制尿素-PAGE胶(这是配制100mL胶的用量，配制更大体积的胶则需以此用量为基础按比例增加)
A：新鲜配制10%的APS(过硫酸*)：按每0.1 克过硫酸*干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP 管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。
B：新鲜交联度为29:1的40%的*烯酰胺-甲叉双*烯酰胺溶液(AB溶液，下同)：在装有77.34 g电泳级*烯酰胺干粉的瓶中加入约120mL自备的去离子水，然后将全部甲叉双*烯酰胺加入到同一塑料瓶中(可以加少量*烯酰胺溶液冲洗出来以避免粉末有毒粉末飘出。甲叉双*烯酰胺溶解度低，不会溶解在这少量溶液中)。充分摇晃混匀后所得溶液即40%的AB溶液。配制40%而非30%的原因是这样可以在下步留出足够空间加尿素。
C：配尿素-PAGE胶：在一个250mL的三角瓶中，先按下表的用量加入去离子水、40%AB溶液和10×TBE缓冲液。*烯酰胺单体溶液具有神经毒性，一定要戴手套操作。

PAGE胶浓度	各成分用量(尿素为克，其余单位是mL)			补水到(mL)
	尿素	40%AB溶液	10×TBE缓冲液
5%	42	12.5	5.0	100
6%	42	15.0	5.0	100
7%	42	17.5	5.0	100
8%	42	20.0	5.0	100
9%	42	22.5	5.0	100
10%	42	25.0	5.0	100
11%	42	27.5	5.0	100
12%	42	30.0	5.0	100

D：搅拌溶解，然后用滤纸过滤。zuì好能抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气(氧气能抑制*烯酰胺聚合反应)，无条件也可以不脱氧。
E：加入500μL 10%APS和100μL TEMED，迅速摇匀后倒胶。
F:在胶的液面距离达到顶部时停止灌胶，插入梳子。
G:室温聚合30-60分钟(低温抑制聚合反应)。
H: 拔出梳子，用0.5×TEB液冲洗加样孔。

三、样品准备
2. 对一般样品、测序样品、微卫星DNA、AFLP样品、DDRT样品、RPA样品：将样品跟上样液1:1 混合，95℃ 3分钟变性，然后放冰上待用。
3. 对TGGE样品：可以直接上样。

四：电泳
4. 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够0.5×TEB电泳液。
5.预电泳5-30分钟将冰上放置的样品上样。
6.连接电源线，打开电源开关。根据胶的大小选择功率(固定功率可以固定产热，这样不容易发生过热而使胶板破裂的现象。如果固定电流或电压，产热都将随电泳时间而变化，不好控制)。对小胶一般用5-6W 固定功率，大胶用15-25W 固定功率。
7. 终止电泳，取出凝胶进行后续的处理(如银染)。注意：如果银染，必须延长固定时间以便让洗出尿素，否则残留尿素会干扰后面的银染。