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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
288
- 英文名:
Protein Quantitation Kit By Bradford
- 保质期:
9个月
- 供应商:
北京百奥莱博科技有限公司
- 保存条件:
-20℃
特别提示:包括改良Bradford法蛋白定量试剂盒在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:改良Bradford法蛋白定量试剂盒
英文名称:Protein Quantitation Kit By Bradford
产品规格:1000次|2500次
本试剂盒是在世界上常用的蛋白浓度检测方法之一Bradford法基础上(考马斯亮蓝结合显色法)改进而成。当Bradford染色液(考马斯亮蓝)和蛋白在酸性条件下结合时,最大吸光值波长立刻由465 nm转移至 595nm,同时颜色由褐色转为蓝色,通过测定吸光值大小并对照标准蛋白的吸光值,推算出蛋白浓度。
试剂盒组份(1000次):
蛋白标准(5mg/ml BSA)—————1ml
Bradford染色液—————————200ml
产品特点:
1.灵敏度高,检测浓度下限达到25μg/ml,最小检测蛋白量达到0.5μg,待测样品体积为1-20μl。
2.检测速度极快,10-20个样品只需不足10分钟即可完成。
3.在50-1000μg/ml浓度范围内有较好的线性关系。
注意事项
1. Bradford 染色液含有刺激性或者腐蚀性化合物,操作时要戴乳胶手套,避免沾染皮肤,眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时,要用大量清水或者生理盐水冲洗。
2. Bradford 染色液中考马斯亮蓝易聚集成团,每次使用前请颠倒6~8 次并且竖直抓住瓶口做水平划圈动作,旋转瓶中液体,帮助充分混匀,但不可以上下振荡混匀。
3. 低温会降低Bradford 染色液的敏感度,因此每次使用前应该使Bradford 染色液回复到室温。仅仅将需要的Bradford 染色液复温,可以减少复温时间。倒出每次需要的Bradford 染色液回复到室温,将原瓶放回冰箱。
4. 蛋白标准请在全部溶解后先混匀,再稀释成一系列不同浓度的蛋白标准。标准品曲线配制时,如果吸量不准确或者加样枪不精确会造成标准曲线相关系数减小,可根据需要使用倍比梯度稀释的方法来配制,或者使用精确度高的加样枪。
5. 由于Bradford 法在蛋白浓度增高到一定时候,颜色反应并不成比例增加,因此得到的标准曲线只是在一定范围内可以近似看成直线,每次应按照实际测得的标准曲线计算出大致精确的蛋白浓度。
6. 需要酶标仪一台,最佳检测波长为595nm,也可以在570-610nm 之间波长测定,但会降低一些敏感度;并需96 孔板。如果没有酶标仪,也可以使用普通的分光光度计测定,但是测定蛋白浓度时,需根据测定吸光度的杯子的体积,按比例调整Bradford 染色液和样品的体积。使用分光光度计测定蛋白浓度时,每个试剂盒可以测定的样品数量可能会显著减少。
7. Bradford 法测定蛋白浓度不受绝大部分样品中的化学物质的影响,样品中巯基乙醇的浓度可高达1M,二硫苏糖醇的浓度可高达5mM。但受略高浓度的去垢剂影响。需确保SDS 低于0.125%,Triton X-100 低于0.125%,Tween 20 低于0.06%。可以考虑用超纯水稀释,透析/除盐,ACETONE/TCA 沉淀蛋白后重溶于超纯水等方法来消除干扰物质的影响。
储存条件:-20℃,有效期9个月。
本制品别名:改进型Bradford法蛋白定量试剂盒|Bradford蛋白浓度测定试剂盒
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文献和实验Bradford法蛋白定量(Bradford Protein Assay )
Bradford Assay is a rapid and accurate method commonly used to determine the total protein concentration of a sample. The assay is based on the observation that the absorbance maximum for an acidic solution of Coomassie Brilliant Blue G-250
原理:这一方法基于考马斯亮蓝G-250有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下,可配成淡红色的溶液,当与蛋白质结合后,产生蓝色化合物,反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值,化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系,因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。 溶液: ①Bradford储存液 100ml95%乙醇 200ml88%磷酸 350mgServaG蓝 室温下长期保持稳定。 ②Bradford
(一)实验原理 双缩脲法(Biuret法)和Folin—酚试剂法(Lowry法)的明显缺点和许多限制,促使科学家们去寻找更好的蛋白质溶液测定的方法。1976年由Bradford建立的考马斯亮兰法(Bradford法),是根据蛋白质与染料相结合的原理设计的。这种蛋白质测定法具有超过其他几种方法的突出优点,因而正在得到广泛的应用。这一方法是目前灵敏度最高的蛋白质测定法。考马斯亮兰G-250染料,在酸性溶液中与蛋白质结合,使染料的最大吸收峰的位置(lmax),由465nm变为595nm,溶液的颜色
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