His-tag蛋白纯化树脂(镍柱)

特别提示：包括His-tag蛋白纯化树脂(镍柱)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：His-tag蛋白纯化树脂(镍柱)
英文名称：His-tag Purification Resin
产品货号：YT616
产品规格：10ml|100ml

本品是一种新型的可以兼容还原剂和螯合剂，并能简单、快速、高效并且高特异性地纯化His标签蛋白的纯化介质。

通常带有6个组氨酸标签的重组蛋白(6xHis-tagged recombinant protein)或带有6个以上连续组氨酸标签的重组蛋白，被称为His标签蛋白。蛋白样品溶液通过本品时，重组蛋白His标签上的组氨酸残基能特异性地结合到本品中的镍离子上，其它蛋白则不能被结合。洗涤后，His标签重组蛋白可在非变性条件下被洗脱，从而被分离纯化。

本产品对His标签重组蛋白的亲和力强、选择性高、结合容量大，使用本产品可以获得高纯度的His标签重组蛋白，可用于简单、快速、高效地纯化细菌、哺乳动物细胞、昆虫及杆状病毒等多种表达系统中表达的His标签重组蛋白。纯化的蛋白可以用于结构和功能研究、抗体制备、蛋白与蛋白相互作用、蛋白与核酸相互作用等方面的研究。

本产品采用了一种高度交联的6%琼脂糖凝胶(Sepharose CL-6B)为基质，并使用了进一步优化的接臂和镍离子螯合技术，和目前市售的大多数Ni-NTA agarose或类似产品相比，非特异性蛋白结合显著降低，耐受压力强，镍离子螯合非常稳定。和同类产品相比，本产品由于镍离子基本不会流失，重复使用本纯化介质时不需要重新装载镍离子。

Ni-NTA agarose以及绝大多数类似的镍柱产品不能耐受蛋白样品中常见浓度的还原剂如二硫苏糖醇(DTT)、β-巯基乙醇等以及常见浓度的螯合剂如EDTA等，但本产品可以很好地耐受DTT等还原剂以及EDTA等螯合剂。本产品可耐受20mM DTT等还原剂，以及20mM EDTA等螯合剂。这为需要添加还原剂或螯合剂的蛋白样品的纯化提供了可能性。本产品不兼容8M尿素和6M盐酸胍。对于包涵体蛋白的纯化，在采用8M尿素或6M盐酸胍溶解蛋白的情况下，需要通过透析去除尿素和盐酸胍后才能使用本产品进行His标签蛋白的纯化。

本产品已经螯合了镍离子，呈蓝色，凝胶的颗粒直径为45-165μm。可耐受的最大压力为0.025MPa，约合5.8psi。采用固定流速进行蛋白纯化时的推荐流速为0.5ml/min。

本产品可以高容量、高特异性地结合His标签蛋白。最大蛋白结合量为20-30mg蛋白/毫升凝胶。实际使用时的最大结合量取决于待纯化的His标签重组蛋白的分子量大小，分子量越大则最大结合容量越大，分子量越小则最大结合容量越小。对于分子量为50kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为6-10mg，对于分子量为100kD的蛋白，每毫升凝胶的实际最大纯化量约为12-20mg。但对于分子量相同的蛋白，也会因为蛋白本身特性的不同，结合的最大容量也会有所不同。

本产品储存在30%乙醇中，10ml总体积中5ml为凝胶，5ml为液体。使用时宜把凝胶充分重悬后再吸取。

本产品最多可纯化100-150mg带有His标签重组蛋白。对于分子量为50kD的带有His标签重组蛋白，一个包装的本产品实际最多可纯化约30-50mg蛋白。

注意事项：
1. 本产品使用过程中，缓冲试剂如Tris、HEPES、MOPS等的浓度不宜超过100mM，EDTA浓度不宜超过20mM，SDS和sarkosyl的浓度不宜超过0.3%，Triton、Tween、NP-40的浓度不宜超过2%，脱氧胆酸钠、CHAPS的浓度不宜超过1%，组氨酸浓度不宜超过20mM，钙离子浓度不宜超过5mM，钠离子和镁离子浓度可以高达2M，甘油浓度可以高达50%。其它未提及试剂的兼容性可以参考上述试剂，但还有待实验验证。
2. 保存和纯化过程中应始终保持凝胶湿润。
3. 若离心不能完全除去蛋白样品中的不溶物，可以将样品溶液用0.45μm的滤膜过滤。
4. 蛋白样品收集后宜尽快完成纯化工作，并应始终放置在4℃或冰浴，以减缓蛋白降解。为有效抑制蛋白降解，可以在裂解液中添加适量的蛋白酶抑制剂混合物。
5. 若使用本说明书提供的条件无法达到理想的纯化效果，可尝试改变洗涤液和洗脱液中咪唑的浓度和(或)pH，以达到最优效果。

储存条件：4℃，有效期一年。


除了His-tag蛋白纯化树脂(镍柱),，我公司还供应以下相关产品：



名称：Western及IP细胞裂解液
货号：YT038
规格：100ml
本品是一种在非变性条件下裂解细胞的裂解液。本细胞裂解液裂解的细胞，可以用于PAGE，Western，免疫沉淀(immunol precipitation，IP)和免疫共沉淀(co-IP)。

Western及IP细胞裂解液的主要成分为20mM Tris(pH7.5)，150mM NaCl，1% Triton X-100，以及sodium pyrophosphate，β-glycerophosphate，EDTA，Na3VO4，leupeptin等多种抑制剂。可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

用Western及IP细胞裂解液裂解得到的蛋白样品，可以用百奥莱博的BCA蛋白浓度测定试剂盒(YT036，YT037)测定蛋白浓度。由于含有较高浓度的Triton X-100等干扰物质，不能用Bradford法测定由本裂解液裂解得到样品的蛋白浓度。

储存条件：-20℃，有效期一年。


名称：30% Acr-Bis (29:1)
货号：KFS077
规格：100ml|500ml
30% Acr-Bis(29:1)即为含30% acrylamide-bisacrylamide 的水溶液，其中acrylamide 和bisacrylamide 的比例为29:1。

30% Acr-Bis(29:1)常用于配制丙*酰胺凝胶(PAGE 胶)，包括SDS-PAGE 胶等，可以用于蛋白或核酸的分离。30% Acr-Bis是实验室的常用储备液。

储存：4℃，避光，有效期12个月。

名称：His标签蛋白纯化柱
货号：JN0178
规格：1ml
  本品是预先用Ni2+耦联的琼脂糖凝胶填好的柱子，采用开放式的设计，配备统一尺寸接口，可以与针筒注射器、蠕动泵、快速蛋白液相色谱（FPLC）及AKTA等纯化系统配套使用，可以一步纯化即可获得His标签融合蛋白。

产品特点：
1、操作简易：柱体已装好层析介质，可直接用于蛋白纯化；
2、结合能力强：结合能力可达40mg 6×His标签蛋白/ml介质；
3、应用范围广：可纯化天然或变性蛋白。

技术实例：

百奥莱博His融合蛋白预装柱结合能力。
Lane1: Loading Sample
Lane2: Flow-through
Lane3: Washing
Lane4: Elution 1
Lane5: Elution 2
Lane6: EDTA
Lane7: Protein Marker(PJN0066)
Equilibrium Buffer : 20mM Tris,500mM NaCl,pH 8.0
Washing Buffer 1: 20mM Tris,500mM NaCl,0.05M lmidazole,pH8.5
Elution Buffer 2: 20mM Tris,500mM NaCl,0.2M lmidazole,pH8.5
Elution Buffer 3: 20mM Tris,500mM NaCl,0.5M lmidazole,pH8.5

名称：氨基黑10B染色液(0.5%)
货号：GL2342
规格：50ml|100ml
用途：
检测醋酸纤维薄膜上的蛋白质

注意事项：
主要由氨基黑10B、乙酸、甲*组成，适用于血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳实验。

储存条件：室温，避光，12个月