细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

特别提示：包括细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒

产品货号：细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒
产品规格：50T/100T

产品简介：
细胞周期与细胞凋亡检测试剂盒是利用细胞内DNA能够和荧光染料结合的特性，细胞各个时期其DNA含量不同从而结合的荧光染料不同，流式细胞仪检测的荧光强度也不一样来检测细胞周期。
细胞发生凋亡时，由于胞浆和染色质浓缩、核裂解，产生凋亡小体，使细胞的光散射性质发生变化。在细胞凋亡的早期，细胞对前向角光散射的能力显著降低，对90°角光散射的能力增加或没有变化。在细胞凋亡的晚期，前向角和90°角光散射的信号均降低。因此可通过流式细胞仪测定细胞光散射的变化观察凋亡细胞。用 PI对细胞进行染色，凋亡细胞由于总DNA量降低，于正常G0/G1细胞群前出现一DNA低染细胞群，即G1峰前出现亚二倍体峰(sub-G1)，细胞凋亡群。

储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。

注意事项：
1．细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
2．固定时在振荡器上轻轻振荡细胞，并缓慢滴加75%乙醇，直接加入会导致细胞团聚的现象，很难重悬成单细胞。或者先用冷PBS悬浮细胞，充分悬浮，使细胞充分分散成单细胞。之后缓慢加入无水乙醇，终浓度为70-75%乙醇。乙醇固定之后须无细胞沉淀。
3．为防止不同批次细胞在实验时本身所出周期不同导致重复性差，可以在实验前进行细胞的同步化处理，减少批间差异。实验细胞应处于对数生长期，不能是完全长满，一般在50～80％比较好。
4．分析的时候需要的是单个的细胞，400目筛网过滤是用来将粘在一起的细胞团滤掉，否则会出现人为的多倍体干扰，不过如果经验丰富的操作人员也可以gate掉。如果没有条件过滤，请在染色之前将细胞弹的很散，再进行染色。
5．组织处理方法：用剪刀将组织剪成小块，用0.25%胰酶消化30min－1h，200－400目筛网过滤细胞，获得单细胞悬液。如组织难以消化，可加入适量胶原酶。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● PBS ● 纯水 ● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪

使用方法：
使用注意事项：
● 细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
● 最好使用含EDTA的细胞消化液。
● 洗涤细胞离心转速不可超过1000rpm/min。

1．收集样本细胞，细胞数量在10×105个以内。
2．用冷PBS洗涤细胞两次。
3．75%冰冻乙醇-20℃固定1小时或4℃固定过夜。
4．用冷PBS洗涤细胞一次。
5．用200-500μl冷PBS重悬细胞。
6．加入Rnase A溶液20μl 37℃水浴30分钟。
7．400目筛网过滤。
8．加入400μl PI染液，轻轻混匀后4℃避光孵育30分钟-1小时。
9．流式检测结果。最大激发波长为488nm。

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