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- 技术资料
- 抗体英文名:
Goat anti-HBsAg,IgG
- 宿主:
山羊
- 库存:
大量
- 抗原来源:
人
- 供应商:
佰泰科
- 是否单克隆:
多克隆
- 规格:
1mg
本品为亲和纯化级羊抗HBsAg,IgG,效价测定(ELISA)>1:40万。与HBsAg抗原有特异性反应;可用于ELISA, IHC, Blot等科学研究实验。
聚丙烯酰胺凝胶电泳纯度>98%。
4℃可短期存放,-20℃分装可长期储存,避免反复冻融。
方法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法:
1.包被:用0.05M PH9.6 碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1~10μg/ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml,4℃过夜。次日,弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。(简称洗涤,下同)。2.15%脱脂乳(SMP)或者BSA 37℃(或者RT封闭)封闭1小时。弃去孔内溶液,用洗涤缓冲液洗3次,每次3分钟。
3. 加样:加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中,置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔,阴性对照孔及阳性对照孔)。
4. 加酶标抗体:于各反应孔中,加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小时,洗涤。
5. 加底物液显色:于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分钟。
6. 终止反应:于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。
7. 结果判定:可于白色背景上,直接用肉眼观察结果:反应孔内颜色越深,阳性程度越强,阴性反应为无色或极浅,依据所呈颜色的深浅,以“+”、“-”号表示。也可测O·D值:在ELISA检测仪上,于450nm(若以ABTS显色,则410nm)处,以空白对照孔调零后测各孔O·D值,若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍,即为阳性。
方法二 用于检测未知抗体的间接法:
用包被缓冲液将已知抗原稀释至1~10μg/ml, 每孔加0.1ml,4℃过夜。次日洗涤3次。加一定稀释的待检样品(未知抗体)0.1ml于上述已包被之反应孔 中,置37℃孵育1小时,洗涤。
同时做空白、阴性及阳性孔对照于反应孔中,加入新鲜稀释的酶标第二抗体(抗抗体)0.1ml, 37℃孵育30-60分钟,洗涤,最后一遍用DDW洗涤。
其余步骤同“双抗体夹心法”的4、5、6。
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文献和实验我是用来做筛选IgG型单克隆抗体,用它做二抗,筛到的阳性克隆化和扩大培养后用SIGMA亚类试剂盒鉴定却是IgM,郁闷!!!这个试剂盒能与IGM交叉?是不是抗轻链?我这种方式不对吗?谁知道有较好的抗鼠IgG而与IgM不交叉的抗体?? 试剂盒说明书:Anti-mouse IgG-HRP Antibody FOR RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN HUMANS. R&D Systems, Inc. 1-800-343-7475 2/21/06
抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig 分五类,即 IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM。Ig 由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成。Ig 的轻链是相同的,有 κ(kappa)和 λ(Lambda)两种型别。五类 Ig 的重链结构不同,这决定了它们的抗原性也不同。IgG 和 IgM 的重链分别称为 γ(gamma)链和 μ(mu )链。 重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序
效应。假使在被测分子的不同位点上含有多个相同的决定簇,例如HBsAg的a决定簇,也可用针对此决定簇的同一单抗分别包被固相和制备酶结合物。但在HBsAg的检测中应注意亚型问题,HBsAg有adr、adw、ayr、ayw4个亚型,虽然每种亚型均有相同的a决定簇的反应性,这也是用单抗作夹心法应注意的问题。双抗体夹心法测抗原的另一注意点是类风湿因子(RF)的干扰。RF是一种自身抗体,多为IgM型,能和多种动物IgG的Fc段结合。用作双抗体夹心法检测的血清标本中如含有RF,它可充当抗原成份,同时与固相抗体和酶标
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