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- 2026年01月18日
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- 保存条件：
长期储存：-20℃ ，短期储存：2-8℃。
- 库存：
大量
- 供应商：
佰泰科
- 英文名：
Human IgM
- 规格：
1mg
人IgM
本品来自血站提供的健康人血清，经过纯化实验得到人IgM。
与其他抗原抗体无交叉反应，经无菌过滤分装，长期储存：-20℃ ，短期储存：2-8℃。
1 . 将抗体结合到蛋白A或蛋白G微珠上。对于一般用途的层析柱，每毫升湿的微珠大约可以结合2mg单克隆抗体或亲和纯化的多克隆抗体。将抗体和蛋白A或蛋白G微珠混合制成稀薄的匀浆，在总量为10ml的溶液中加入大约lml微珠，室温孵育1h，轻轻摇动混匀。
2． 用10倍体积的0.2mol／L硼酸钠（pH9.0）洗涤微珠2次，每次以3000g离心2rain或10 000g离心30s。
3． 用10倍体积的0.2mol／L硼酸钠（pH9.0）重悬微珠，留取相当于10t~l湿微珠的样品。加入足量的二甲基庚二酸酯固体至微珠匀浆中，使终浓度为20mmol／L。
4． 室温孵育30min，并轻轻混匀。留取相当于10t~l偶联微珠的样品。
5． 用0.2mol／L乙醇胺pH8.0．洗涤微珠1次以终止反应。然后重悬于0.2mol／L乙醇胺，室温孵育2h，轻轻混匀。微珠用PBS洗涤后，重悬于PBS，加入硫柳汞保存。
6． 将偶联前和偶联后的微珠样品加入Laemmli样品缓冲液中煮沸后，检查偶联效果。分别取相当于1ul和9ul 2份样品在10％SDS—聚丙烯酰胺凝胶中电泳，并用考马斯亮蓝染色，偶联效果良好时，在偶联前的微珠样品中显示一条55kDa的重链带，而偶联后的样品无此区带。
7． 将抗体包被的微珠转入合适的层析柱中，用PBS冲洗容器收集残留的微珠。如果可能，仅使用结合制品中全部抗原所需的抗体微珠基质。
8． 用20倍柱床体积与制备抗原相同的缓冲液洗柱。
9． 将抗原液加到柱上，按每毫升柱体积大约lml／h的速度使抗原溶液流过层析柱，可以用一台蠕动泵控制。
10． 用20倍柱床体积的结合缓冲液（PBS）洗柱。
11． 用20倍柱床体积的预洗脱缓冲液洗柱，建议使用预洗脱缓冲液。
12． 采用分段洗脱法，连续以0.5倍柱床体积的洗脱缓冲液通过层析柱，分管收集每一组分。如果用过高或过低pH值的缓冲液洗脱，收集管内需加入0.1倍柱床体积的缓冲液。
13． 检测每管的抗原含量，将浓度高的各管合并。根据抗原的用途，需对获得的蛋白洗脱液透析以改变缓冲液。
14． 用20倍柱床体积的起始缓冲液流经基质，使层析柱再生。加入0.01％硫柳汞可长期保存（4℃）。
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文献和实验未染色标准品，10 μL;(2) 大鼠肝裂解液，10 μg;(3) 溶菌酶，6 μg;(4) Bio-Rad® 宽范围标准品，1:50稀释;(5) BSA ，6 μg;(6) MagicMark™ XP标准品;10 μL;(7)人IgG，6 μg;(8)人IgM，6 μg;(9)大肠杆菌裂解液，10 μg;(10) Novex® Sharp未染色标准品，10 μL。 误区：NuPAGE® 凝胶跑得太慢了 事实
3.异种动物 例如用人IgM作为Ab1免疫小鼠制备单克隆Ab2。由异种动物免疫制备的Ab2血清中，除抗Id外还含有抗同种型的抗体。 （三）抗独特型抗体的检测 抗Id抗体的鉴定至关重要。通常采用免疫学检测方法如ELISA、RIA、免疫荧光和中和试验等，可根据具体条件和需要加以选用。抗Id的鉴定必须设置充分的对照，确保检测结果的可靠性。例如，在鉴定小鼠源性抗原特异性人IgM抗独特型抗体时，用正常人IgM作为对照。将Ab1（抗原特异性人IgM）包被微孔板，然后加检测样品（小鼠源性抗Id
到固相上。因此如用抗人IgM作为二抗，间接测定IgM抗体，必须先将标本用A蛋白或抗IgG抗体处理，以除去IgG的干扰。在临床检验中测定抗体IgM时多采用捕获包被法。先用抗人IgM抗体包被固相，以捕获血清标本中的IgM（其中包括针对抗原的特异性IgM抗体和非特异性的IgM）。然后加入抗原，此抗原仅与特异性IgM相结合。继而加酶标记针对抗原的特异性抗体。再与底物作用，呈色即与标本中的IgM成正相关。此法常用于病毒性感染的早期诊断。甲型肝炎病毒（HAV）抗体的检测模式。类风湿因子（RF）同样能干扰捕获包被
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