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- 2025年09月18日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温避光
- 保质期：
长期
- 英文名：
Urea
- 库存：
9999
- 供应商：
上海圻明生物
- 规格：
g
产品仅供科研，不用于临床。
MTT溶液的配制方法
通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。
普通MTT法实验步骤：
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
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文献和实验一、实验目的 1.深入了解蛋白质的变性作用的含义。 2.掌握常用蛋白质变性剂的种类。 二、实验原理 天然蛋自质分子中的肽链以一定的方式盘绕曲折，形成特定的构象。这种构象的维持，主要依赖于蛋白质分子中的氢键。尿素能破坏氢键，导致蛋白质分子结构松弛，使蛋白质变性，变性后，蛋白质的肽链就伸展开来，从而使原来包藏在分子内部的－SH 暴露，能与巯基试剂作用，在一定范围内，暴露的－SH 随着变性程度的加深而增加，因此测定
CO（ NH2 ） 2 ，亦称脲。相当于碳酸的二酰氨。在人的蛋白质分解最终产物中占有相当大的比例。在普通膳食的情况下，每日尿中可排出 25— 30克，接近尿中总氮量的 87％。一般来说，两栖类的成体、软骨鱼类和哺乳类具有相同的倾向。因在这些生物体中，尿素是在鸟氨酸循环中形成的，所以排出尿素的动物具有所必需的整个酶系统，在动物中欠缺其中任何一种酶便排出尿酸（鸟类）或氨（硬骨鱼类）。刀豆和大豆植物的种子中存在很多的脲酶，它可使尿素水解为二氧化碳和氨。尿素也是很重要的肥料。
成分 蛋白胨 1g 氯化钠 5g 葡萄糖 1g 磷酸二氢钾 2g 0.4%酚红溶液 3mL 琼脂 20g 蒸馏水 1000mL 20%尿素溶液 100mL pH7.2±0.1 制法 将除尿素和琼脂以外的成分配好，并校正pH,加入琼脂，加热溶化并分装烧瓶。121℃高压灭菌15min.冷至50~55℃，加入经除菌过滤的尿素溶液。尿素的最终浓度为2%,最终pH应为7.2±0.1.分装于灭菌试管内，放成斜面
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