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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件:
常温避光
- 保质期:
长期
- 英文名:
Horseradish Peroxidase
- 库存:
9999
- 供应商:
上海圻明生物
- 规格:
g
产品仅供科研,不用于临床。
MTT溶液的配制方法
通常,此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此,可以称取MTT 0.5克,溶于100 ml的磷酸缓冲液(PBS)或无酚红的培养基中,用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌,放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中,容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光,觉得这样比较好。 需要注意的是,MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力,但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候,为了保证实验结果的线性,MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配,过滤后4ºC避光保存两周内有效,或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存,避免反复冻融,最好小剂量分装,用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里,用的时候现配,直接往培养板中加,没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性,用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌,MTT对菌很敏感;往96孔板加时不避光也没有关系,毕竟时间较短,或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
配制MTT时用PBS(ph=7.4)溶解。PBS配方:Nacl 8g + Kcl 0.2g + Na2HPO4 1.44g + KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。
普通MTT法实验步骤:
1:接种细胞:用含10%胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液,以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板,每孔体积200ul.
2: 培养细胞:同一般培养条件,培养3-5天(可根据试验目的和要求决定培养时间)。
3:呈色:培养3-5天后,每孔加MTT溶液(5mg/ml用PBS配制,pH=7.4)20ul.继续孵育4 h,终止培养,小心吸弃孔内培养上清液,对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO,振荡10min,使结晶物充分融解。
4:比色:选择490nm波长,在酶标仪上测定各孔光吸收值,记录结果,以时间为横坐标,吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
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文献和实验HRP是一种分子量达44 000的糖蛋白,由无色的酶蛋白和深棕色的铁卟啉结合而成,中性糖和氨基糖约占18%,主要有甘露糖、木糖、阿拉伯糖和己糖胺等。每一个HRP分子中含一个氯化血红素IX作辅基,该辅基在403nm波长处有最大吸收峰,而去辅基的酶蛋白在275nm波长处有最大吸收。HRP在403nm的OD值与275nm的OD值之比,也就是所谓的RZ(Reinheits Zahl)值。RZ值仅说明血红素基团在HRP中的含量,并非表示HRP制剂的真正纯度,而且RZ值高的HRP制剂,并不意味着酶活性也高
辣根过氧化物酶 horseradish peroxidase
缩写为FRP.为过氧化物酶之一种,含于辣根( horseradish)中。 1941年 F· Thcorell曾提取其结晶。将之吸入细胞或注入之后,以 3, 3′ -二氨基联苯( 3, 3′- diaminobenzidine)为底物进行作用时,在光学或电子显微镜下可以看到一定的标记。最早为 W. Straus( 1959)曾用以鉴别吞噬小体 Ph-agosome. K. Kristensson和 G. Olsson,( 1974)在对利用轴突内逆行运输的神经元、轴突分支的着染,并而用于
1. 8 mg 辣根过氧化物酶放入1 ml玻璃瓶,加入1 ml双蒸水溶解,液体呈棕色。 2. 放入一个磁力搅拌子,电磁搅拌同时逐滴缓缓加入新配制的 NaIO4 0.2 ml,室温下继续搅拌40 min,液体呈现草绿色。 3. 将全部溶液用滴管装入反复用去离子水冲洗的透析袋中,4 oC 对1 mM pH 4.4的NaAc透析过夜,中间换液3-4次,每次300 ml,溶液最终呈浅棕色。 4.
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