- 询价
- KA&M-BIO
- 进分
- GJ50520
- 2025年09月17日
企业认证
- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 保存条件：
常温避光
- 保质期：
长期
- 英文名：
Tetracycline Hydrochloride
- 库存：
9999
- 供应商：
上海圻明生物
- 规格：
g
产品仅供科研，不用于临床。
MTT溶液的配制方法
通常，此法中的MTT 浓度为5mg/ml。因此，可以称取MTT 0.5克，溶于100 ml的磷酸缓冲液（PBS）或无酚红的培养基中，用0.22μm滤膜过滤以除去溶液里的细菌，放4℃ 避光保存即可。在配制和保存的过程中，容器最好用铝箔纸包住。实验的时候我一般关闭超净台上的日光灯来避光，觉得这样比较好。 需要注意的是，MTT法只能用来检测细胞相对数和相对活力，但不能测定细胞绝对数。在用酶标仪检测结果的时候，为了保证实验结果的线性，MTT 吸光度最好在0-0.7 范围内。
MTT一般最好现用现配，过滤后4ºC避光保存两周内有效，或配制成5mg/ml保存在-20度长期保存，避免反复冻融，最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光以免分解。我一般都把MTT粉分装在EP管里，用的时候现配，直接往培养板中加，没必要一下子配那么多,尤其当MTT变为灰绿色时就绝对不能再用了。
MTT有致癌性，用的时候小心,有条件最好带那种透明的簿膜手套.配成的MTT需要无菌，MTT对菌很敏感；往96孔板加时不避光也没有关系，毕竟时间较短，或者你不放心的时候可以把操作台上的照明灯关掉.
配制MTT时用PBS（ph=7.4）溶解。PBS配方：Nacl 8g ＋ Kcl 0.2g ＋ Na2HPO4 1.44g ＋ KH2PO4 0.24g调pH 7.4,定容1L。
普通MTT法实验步骤：
1：接种细胞：用含10％胎小牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.
2: 培养细胞：同一般培养条件，培养3-5天（可根据试验目的和要求决定培养时间）。
3：呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，pH=7.4)20ul.继续孵育4 h，终止培养，小心吸弃孔内培养上清液，对于悬浮细胞需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加150ul DMSO，振荡10min，使结晶物充分融解。
4：比色：选择490nm波长，在酶标仪上测定各孔光吸收值，记录结果，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。
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文献和实验前阵子做单抗，做了几次细胞融合都没做出来，后面怀疑是SP2/0受支原体污染，细胞生长速度减慢，出现细胞碎片，换液后情况稍好。怀疑受污染后我对细胞做了一系列的处理，终于有一种处理成功地削除了支原体污染，细胞融合也成功了，现在单抗已经做出来。现在想把我的处理方法贴出来，希望对一些遇到同样问题的朋友有用。 处理方法： 以两种抗生素交替使用，第一种是2-3倍于正常浓度的双抗（青霉素、链霉素），第二种是10ug/ml的盐酸四环素。每天都换液，两种抗生素交替使用，开始四天，每天换液两次，持续
前阵子做单抗，做了几次细胞融合都没做出来，后面怀疑是SP2/0受支原体污染，细胞生长速度减慢，出现细胞碎片，换液后情况稍好。怀疑受污染后我对细胞做了一系列的处理，终于有一种处理成功地削除了支原体污染，细胞融合也成功了，现在单抗已经做出来。现在想把我的处理方法贴出来，希望对一些遇到同样问题的朋友有用。 处理方法： 以两种抗生素交替使用，第一种是2-3倍于正常浓度的双抗（青霉素、链霉素），第二种是10ug/ml的盐酸四环素。每天都换液，两种抗生素交替使用，开始四天，每天换液两次，持续
3.对肝肾功能不良，G-6PDH缺陷者、婴儿、孕妇、乳妇应慎用。 4.用药时间不宜过长，一般不超过二个月，能达到防止感染复发即可，避免重复疗程。 制剂与用法 盐酸四环素（tetracycline hydrochloride）口服：0.25～0.5g/次，3～4次/日。 盐酸土霉素（oxytetracycline hydrochloride）口服一次0.5g，3～4次/日。8岁以下小儿30～40
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