Gomori六胺银法尿酸盐染色试剂盒

用于石蜡切片的骨相关酶（TRAP、ALP）的双重染色法

的是Lorch的Gomori法。本实验使用的是同时采用偶氮染色法和偶联反应法的TRAP/ALP染色试剂盒（和光纯药，产品编号294-67001）。关于切片的厚度，Lorch建议为8μm，同时也研究过普通的4μm切片是否能染色、双重染色的顺序应该先染TRAP和ALP中的哪一个、封片剂是否必须选水溶性封片剂等问题。染色法的结果是偶氮染色法中，切片过厚就会有酶扩散现象，即骨基质的TRAP染色倾向染成红色。即使是4μm的切片，只要增强了反应条件（反应温度及反应时间），也能充分染色。也就是说，TRAP染色反应

干细胞成骨诱导后的染色方法和步骤

碱性磷酸酶（ALP）是成熟成骨细胞的标志性酶，同时成骨细胞形成的钙结节也是成骨细胞的标记物。 以ALP为目标物的检测方法： 1 Gomori钙钴法 【染色原理】 ALP在pH值9.4的环境下，以镁离子作为激活剂，能够把β-甘油磷酸钠水解出磷酸，磷酸与高浓度的钙盐结合形成无色的磷酸钙，再与硝酸钴作用形成磷酸钴，经硫化胺处理形成黑色的硫化钴沉淀在酶活性处。 【孵育液配制】 3%β-甘油磷酸钠5ml 2%巴比妥钠5ml 蒸馏水10ml 2%

SP三步法操作指南（原创）

分别为0.3%双氧水和0.3%Triton X-100混合而成。配制方法是先用微波加热的36 ml PBS，再接着加120 ul Triton X-100，并加热一会儿，冷却至临用前加0.4 ml 30%H2O2。4、5%羊血清或封闭血清，用PBS稀释。5、含0.03%H2O2的0.05%DAB（避光）：用20×DAB（1%，10 mg/ml）5 ul+0.1 ul 30% H2O2+95 ul PBS。6、一抗用PBS稀释（也可用抗体稀释液），二抗用中杉金桥的SP染色试剂盒。7、Xylene、梯度