昆明小鼠血清IgG

辛酸-硫酸铵法从人血清中纯化IgG

一、实验目的1、初步掌握从血清中提取纯化IgG的方法步骤。2、了解辛酸-硫酸铵法纯化IgG 的原理。二、实验原理辛酸-硫酸铵法分两步进行。第一步用辛酸沉淀杂蛋白，辛酸为短链脂肪酸，在酸性条件下可沉淀血清或腹水中的白蛋白或其他非Ig蛋白质；第二步利用硫酸铵盐析将Ig沉淀下来，操作步骤如图3-10所示。经SDS-PAGE电泳检测能得到电泳纯度较高的Ig。三、仪器、原料和试剂1、仪器磁力搅拌器、离心机、低温冰柜。2、原料抗血清（兔抗鸡血清）。3、试剂(1) 乙酸-乙酸钠缓冲液：60mmol/L，pH

DEAE-离子交换剂纯化血清IgG

上，然后再分别洗脱下来获得纯品，或者把不需要的成分吸附于离子交换剂上，需要的成分直接流出，得到纯品。本实验采用DEAE-纤维素层析柱纯化血清IgG，利用pH6.7的缓冲液溶解样品IgG，此时IgG粗物中除IgG外，其他杂蛋白均带上不同数量的负电荷，可以和DEAE上的阴离子发生交换吸附于柱上。IgG因不解离带电，而不发生交换吸附，利用此特点，让溶解后的样品流过DEAE纤维素柱，即可直接收集到较纯的IgG。（二）试剂及器材 （1）DEAE-纤维素的活化：称取1g DEAE32或52，放入5ml量筒中，加蒸馏

DEAE—离子交换剂纯化血清IgG

相关专题   （一）原理 离子交换是指液相中的离子与固定相上可解离基团的可逆交换反应。利用这个反应先将要分离的混合物在一定pH的溶液中解离，而后流经固定相，使之与固定相上的可解离基团进行离子交换，吸附于固定相上，凡不能进行交换吸附的成分，则流出层析柱外。再根据交换吸附于固定相上的各组分解离度的差别，运用不同的pH值或不同盐浓度的溶液作流动相，流过层析柱将各组分分别再交换洗脱下来，这样混合物的各组分即被分开，达到分离的目的，此即为离子