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文献和实验,建议4℃冰箱过夜(≥18h)。7、二抗(生物素化山羊抗兔IgG)反应:观察发现,37℃条件下二抗反应20分钟,尽管反应池保持湿润,但在排除了其他因素后,仍然得不到阳性结果。原因在于,二抗没有与其他溶液混匀而聚集在反应池四周,在37℃孵育20分钟甚至更长的时间后,二抗干燥,根本没有充分反应。解决的方法是:二抗的量要相对多些,同时要混匀;随时观察反应池的情况。另外一种原因,就是仪器显示温度37℃,但实际只有23℃,自然结果难以令人满意。因此,查找原因时,不应被表面现象迷惑,应该认真地落实每一
间接IM―PCR (以神经肽Y的检测为例) 【试剂与配制】 (1)TBS:20mmol/L Tris-HCl(pH7.4),150mmoI/L NaCL (2)封闭液:1.5% BSA (用TBS配制) (3)抗神经肽Y单抗 (4)兔抗神经肽Y抗体 (5)生物素化羊抗兔IgG (6)亲合素 (7)DNA指示分子(生物素―AdAT) (8)PCR反应液:5×PCR缓冲液10μl,dNTP 4μl,引物4μl,EP-DNA聚合酶0.5μl,蒸馏水31.5μl
第1节- 试剂1.1涂层缓冲液PBS(137 mM氯化钠,2.7 mM的氯化钾,8.1 mM的磷酸氢二钠,1.5 mM磷酸二氢钾)1.2封闭液5%脱脂乳于PBST中(0.05%Tween-20)1.3稀释剂2%脱脂乳于PBST中(0.05%Tween-20)1.4柠檬酸缓冲液3.65克柠檬酸,4.76克磷酸氢二钠,溶解于500毫升双蒸水1.5兔抗GST抗体兔抗GST抗体1.6 HRP结合山羊抗兔IgG(H + L)山羊抗兔IgG(H + L),結合过氧化物酶第2节- 分析方法注:以下方法是一个
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