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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
99
- 英文名：
HotStar HiFidelity Polymerase Kit
- 保质期：
已收到实际货物为准
- 供应商：
北京诺博莱德科技有限公司
- 保存条件：
已收到实际货物为准
- 高灵敏度、高特异性
- 独特的UA/TA克隆
- 保真性比Taq DNA Polymerase高10倍
- 可在室温下构建反应体系，酶活化速度快
经优化的即用型试剂盒包括高保真PCR所需的所有试剂、酶、缓冲液和dNTPs。HotStar HiFidelity DNA Polymerase是一种经特异修饰的产生A突出末端的热启动校对酶，能够直接、高效的进行UA/TA克隆。缓冲液中包含Factor SB，可在PCR体系建立时防止引物和模板的降解，提供高特异性和高保真PCR。此外，Q-Solution能够有效扩增难扩增的模板（如富含GC的模板）。
Performance
HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含一种经特异修饰的热启动校对酶，可在PCR体系建立时防止引物和模板的降解，提供高保真PCR，无需优化。通过检测，HotStar HiFidelity DNA Polymerase Kit可确保高特异性和高灵敏度扩增（参见"Highly sensitive and reliable PCR"）。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性比Taq DNA polymerase高10倍。新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含专有的Factor SB，提高PCR的灵敏度和可靠性，尤其在起始模板量较少的条件下。该试剂盒同时提供Q-Solution，可进一步优化PCR（参见"Amplification of difficult templates"）。
HotStar HiFidelity DNA Polymerase特性
浓度：2.5 units/μl
5'–>3'外切酶活性：否
3'–>5'外切酶活性：是
额外添加A（末端转移酶活性）：是
半衰期：95°C条件下>4小时
核酸酶污染：否
蛋白酶污染：否
RNase污染：否
Principle
通常利用高保真酶3'→5'核酸外切酶的活性去除错配的整合碱基。但是，该活性会在PCR体系建立和起始时降解引物，而导致非特异性启动、扩增，甚至扩增产物失败，尤其在模板量较少的条件下。
HotStar HiFidelity DNA Polymerase
HotStar HighFidelity DNA Polymerase是从新型Pyrococcus spp.中特异分离的，经过化学修饰使聚合酶和核酸外切酶失活。5分钟热启动激活酶组分，使PCR起始阶段就有高校对能力。独特的修饰确保体系建立过程中引物和酶的完整性，防止错误启动。HotStar HiFidelity DNA Polymerase的可靠性能确保高特异性和高灵敏度的扩增。
HotStar HiFidelity PCR Buffer
新型的HotStar HiFidelity PCR Buffer包含独特的PCR添加剂，以及浓度已经优化的dNTPs和MgSO4。Factor SB是一种特有的PCR添加剂，提高PCR的灵敏度和可靠性（参见"Highly sensitive and reliable PCR"）。新型的Factor SB可确保模板DNA的完整性，该DNA常常会被具有3'→5'核酸外切酶活性的高保真酶降解。
预优化试剂能够可靠的扩增特异性PCR产物，且出错率低。该缓冲液通过提高每个PCR扩增退火过程特异性引物的结合比例，确保PCR每个循环特异性扩增（参见"Increased specificity of primer annealing"）。独特的KCl和(NH4)2SO4平衡组合，使得HotStar HiFidelity PCR Buffer与传统的PCR缓冲液相比在很宽的温度和Mg2+浓度范围内都有严格的引物退火条件和高度的特异性，无需进行耗时的优化。
HotStar HiFidelity PCR Buffer也含有浓度经特定优化的dNTPs，用于方便的建立PCR反应体系和获得可靠的结果。该缓冲液最大程度上增加了HotStar HiFidelity DNA Polymerase的保真性，确保低出错率。HotStar HiFidelity Polymerase Kit灵敏度高、特异性强以及使用HotStar HiFidelity PCR Buffer而无需优化的特性使其适合多种高保真PCR应用。
Q-Solution
HotStar HiFidelity Polymerase Kit同时提供Q-Solution，一种新型的PCR添加剂，通过更改DNA熔解行为促进难扩增模板的扩增。这种独特的试剂可进一步优化由模板引起的表现不理想的PCR，如过多的二级结构和富含GC的模板（参见"Amplification of difficult templates"）。不同于DMSO和其他PCR添加剂，Q-Solution的浓度是确定的，没有毒性，并且保证PCR的纯度。而且PCR中加入Q-Solution不会影响PCR的准确性。
完整的试剂盒规格
HotStar HiFidelity Polymerase Kit包含PCR所需的所有组分。无需额外购买其他试剂或缓冲液。
Procedure
HotStar HiFidelity操作流程高效，只需按照试剂盒中已优化的试验方案操作即可。HotStar HiFidelity DNA Polymerase经过化学修饰，可以暂时性的使聚合酶和3'–>5'核酸外切酶失活。这种抑制作用可使引物和模板在PCR体系建立和循环起始阶段过度降解。95°C条件下孵育5分钟即可激活聚合酶和校对活性，可以整合入已有的热循环程序。这种修饰确保可在室温下方便的建立反应体系，而不会影响PCR的特异性和产量。
TA/UA克隆
与其他高保真DNA聚合酶相比，使用HotStar HiFidelity DNA Polymerase获得的PCR产物可直接用于TA-或UA-克隆（参见"Efficient TA/UA cloning"）。
产物的长度和灵敏度
鉴于HotStar HiFidelity Polymerase Kit的高灵敏度，即使使用极微量的起始原料也可扩增片段（如1 ng的人基因组DNA）。使用基因组DNA获得的产物长度可达5 kb，而λDNA获得的产物长度可达10 kb，表明HotStar HiFidelity Polymerase Kit适合多种应用，包括用于克隆的长片段DNA的扩增。
Applications
HotStar HiFidelity Polymerase Kit适合多种要求高灵敏度和低出错率的热启动PCR应用，如克隆和定点突变。
| Features | Specifications |
| 应用 | Cloning, mutation analysis, TA- or UA-cloning procedures |
| 酶活 | 3' -> 5' exonuclease activity, A-addition |
| 预混液 | No |
| 反应类型 | PCR amplification, proofreading |
| real-time或终点法PCR | Endpoint |
| 样本/目标类型 | Genomic DNA and cDNA |
| 单一或多重 | Single |
| 有/无热启动酶 | With hotstart |
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| 商品编号 | 商品品名 | 规格 | 品牌 |
| 202602 | 高灵敏度，高保真热启动PCR聚合酶 | 100U | Qiagen |
| 202605 | 高灵敏度，高保真热启动PCR聚合酶 | 1000U | Qiagen |
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文献和实验一些高保真没的效率要远远低于Taq polymerase,所以可能需要的酶的量也要大一些. 另外, 一般的 情况下, 变性的温度可以使用90~92度, 变性的时间也可以缩短,从而保证polymerase的活性 d. template 50ul PCR SYSTEM ================================ human gDNA 0.1ug-1ug E.Coli 10ng-100ng LamadaDNA 0.5ng-5ng Plasmid DNA 0.1ng
。他的trizol曾经由其他公司OEM制作,现在已经自己生产.本来Trizol是一个专利的品牌,但是国内也有不少仿制的品牌，基本的原理是一样，配方稍有不同。 RNeasy kit: Qiagen的王牌产品 ,号称适用于各种RNA抽提,其实在特殊的组织比如大脑,肌肉,脂肪组织还是选择特殊抽提试剂为佳.此外细菌RNA抽提也最好使用专用抽提试剂盒.这些产品Qiagen都提供. 注意凡是Qiagen的试剂盒抽提应该是没有5S带的,因为它将5S破坏掉了.其他的比如roche,promega等都很好的是的. 尤其
总RNA。4.不能用氯化镁代替硫酸镁。Tf1DNA聚合酶在用硫酸镁和AMV/Tf15X反应液时活力有很大提高。5.AccessQuick™ RT-PCR System 就是预装的Acess RT PCR system，由于镁离子已经加到反应体系中，所以使用自主性稍为受限，但是更方便些，适合不太难的RT过程。价格稍为便宜些。性价比比较高，推荐品种。Takara one step RNA PCR kit 使用的是1.AMV everse Transcriptase 可惜takara在酶制作方面主要
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