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- 2025年07月16日
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北京诺博莱德科技有限公司
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可用20-200 nM MitoRed对线粒体染色。MitoRed的激发和发射波长分别为560 nm和580 nm。
染色例：
1. 将50 µg MitoRed溶解到78 µl DMSO中制备成1 mM MitoRed-DMSO溶液。
2. 用载玻片准备细胞。细胞数目应为5×104-5×105个/ml。
3. 孵育该载玻片，用PBS或Hank's液洗涤细胞。
4. 用培养基稀释1 mM MitoRed溶液以制备20-200 nM MitoRed缓冲液。
5. 将MitoRed缓冲液a) 加入载玻片并在37℃下孵育30分钟至1小时。
6. 去除MitoRed缓冲液并用培养基洗涤细胞。b)
7. 用带有罗丹明滤光片的荧光显微镜观察细胞。
a) 加入细胞前将MitoRed缓冲液放在37℃下孵育。
b) 洗涤细胞后为了固定，加入10%福尔马林缓冲液并孵育15-20分钟，接着用PBS洗涤。
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文献和实验. Plant Physiol.127, 1694-1710. 23. Douce, R., Bourguignon, J., Brouquisse, R., and Neuburger, M. (1987) Isolation ofplant mitochondria—general principles and criteria of integrity. Methods Enzymol.148,403-415. 24. Pastore, D., Stoppelli, M. C., Di
5.0 （二）凝胶过滤法 为纯化免疫金探针的最好方法，其特点是简便，过滤的胶体金颗粒比较均匀，不容易凝集，而离心方法转速高，时间长，胶体金颗粒沉淀容易凝集，用凝胶过滤克服了这一弱点。选用本方法时胶体金溶液必须用牛血清白蛋白作稳定剂。具体操作过程如下： （1）将浓缩好的胶体金以1500r/min离心去掉大的聚合物。吸出上清待过柱。 （2）柱高34cm,直径1cm,加样体积为柱床体积的1/10。 （3）丙烯葡聚糖S-400（Sephacryls—400 , Pharmacia, Sweden）装柱
1h）， 同时以不加AnnexinV-FITC及PI的一管作为阴性对照。 2、贴壁培养的细胞染色：先用0.25%的胰酶消化，洗涤、染色和分析同悬浮细胞。 3、爬片细胞染色：同上，最后用荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜进行观察。 结果 [图4、图5] 注意事项 1、整个操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞。 2、操作时注意避光，反应完毕后尽快在一小时内检测。 三、线粒体膜势能的检测 线粒体在细胞凋亡的过程中起着枢纽作用，多种细胞凋亡刺激因子均可诱导不同的细胞发生凋亡
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