由于醛反应性探针(ARP)的醛特异性反应,因此可被用来检测DNA中的脱碱基位点(AP位点,脱嘌呤/脱嘧啶位点)。ARP与醛基和酮基反应,并将生物素加入DNA中的AP位点。接着使用过氧化物酶标记的亲和素和氧化显色染料就可检测到带生物素标签的DNA。ARP方法已用于检测DNA的1x104核苷酸中少于1个AP的位点。Dojindo提供DNA损伤量化试剂盒(产品编码:DK02),它包含了检测每1x105碱基对1-40个AP位点所必须的全部试剂及组份。ARP在水中的溶解度很高,并且此贮存液可在 4℃ 下存放一年而基本没有反应性的损失。DNA脱碱基位点的标记过程
1. 用水制备10 mM的ARP。
2. 用TE缓冲液(pH 7.4)将DNA浓度调整到100 μg/ml。
3. 将等量的DNA与ARP混合并在37℃下孵育1小时。
4. 使用乙醇沉淀或膜过滤管分离ARP标记的DNA。
5. 将DNA颗粒溶解到TE中以制备10-100 μg/ml的溶液。
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