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北京诺博莱德科技有限公司
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染色例:
荧光染料Hoechst 33258是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,也称bisBenzimide H 33258或HOE 33258,常用于细胞凋*检测。
Hoechst 33258是一种可以穿透细胞膜的蓝色荧光染料,对细胞的*性较低。
Hoechst染料可透过细胞膜并对DNA染色而发出强烈的蓝色荧光。它们在聚AT序列的富集区域的小沟处与DNA结合。Hoechst 33258和Hoechst 33342均可溶于水并在水溶液中保持稳定。Hoechst-DNA的激发和发射波长分别为350 nm和460 nm。
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文献和实验,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。E. 均匀滴上0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干。F. 用PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟。G. 滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。H. 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。3. 组织切片 A. 常规包埋切片后,脱腊,透明。 B. PBS或0.9%NaCl洗两遍,每次3分钟,吸尽液体。洗涤时宜用摇床,或手动晃动数次。可在六孔板中操作。 C. 加入0.5ml
Testing for Mycoplasma by Indirect DNA Stain (Hoechst 33258 stain)
stain solution (Prod. No. H6024 ) Vero cells (Prod. No. 84113001-1v1) Mountant (Autoclave 22.2ml 0.2M citric acid with 27.8ml 0.2M disodium phosphate. Add 50ml glycerol. Filter sterilize and store at 4ºC) (Prod. No. M1289 ) Mycoplasma
双苯咪唑类的Hochest-33342和33258及 JC-1染色
可直接离心收集(1 000r/min,5min)。对于贴壁生长的细胞可以先收集细胞培养液(可能含有因凋亡而悬浮的细胞),再用胰酶消化贴壁细胞,然后将两者合并,离心收集细胞并用1×PBS洗细胞沉淀物。 (3)固定:细胞沉淀物悬浮在300ul甲醛(4%)中固定30min,然后经PBS洗涤后离心收获细胞。 (4)染色:细胞在100ul Hoechst-33342(sigma)中染色10min,然后将细胞悬液滴在载片上,盖上盖玻片,用荧光显微镜观察并拍照
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