两步法RT-qPCR试剂盒(SYBR) 核酸扩增(PCR)

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北京百奥莱博专注于生命科学和生物技术领域，致力于为客户提供包括两步法RT-qPCR试剂盒(SYBR) 核酸扩增(PCR)在内的一系列分子生物学试剂产品，并提供一系列相关的技术服务。

名称：两步法RT-qPCR试剂盒(SYBR)
编号：JN0052
规格： 50次RT+300次qPCR
英文名：SYBR Two-Step qRT-PCR UltraMix
品牌：百奥莱博
产地：北京
  本试剂盒能以动物、植物和微生物的总RNA或mRNA为模板，用BalbScript All- in-one 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix进行反转录，用BalbScript SYBR qRT-PCR UltraMix进行荧光定量。具有灵敏度高，合成能力强，扩增效率高的优点。
  本制品配有不同浓度的ROX Reference Dye，用于不同仪器校正孔与孔之间产生的荧光信号误差。

操作方法：
一、第一链cDNA合成
融化后，将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
1、按顺序加入下面的反应物

 

加入物	加入量
模板RNA	总RNA(0.1ng -5μg) poly(A) mRNA(10pg) 特异性RNA(0.01pg)
PreMix 1st Strand cDNA Synthesis UltraMix	10μl
RNase Free Water	至20μl

2、可选优化步骤。如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构，可先将模板和引物的混合液轻轻混匀，短暂离心，65℃孵育5分钟，冰上冷却。
3、轻柔混匀后离心。如果RNA模板中不含poly A结构，25℃先孵育5分钟，随后42℃孵育60分钟。
4、70℃加热5min终止反应。
  反应产物可直接用于PCR反应，如果不立即使用，在-20℃可保存一周左右。如想延长保存时间，建议使用-70℃保存。
二、实时定量
合成的第一链cDNA可直接用于PCR或qPCR。第一链cDNA反应液体积不能超过PCR反应体系的1/10。通常50μl的PCR反应体系中，第一链cDNA反应液加入2μl。
·用ROX Reference Dye I校准的Real Time PCR仪有：
Applied Biosystems 5700/7000/7300/7700/7900/7900 HT/7900 HT Fast；Applied Biosystems StepOne/StepOne Plus；其他仪器。
·用ROX Reference Dye II校准的Real Time PCR仪有：
Applied Biosystems 7500/7500 Fast；Stratagene MX4000/MX3500P/MX3000P；其他仪器。
·不需要用ROX Reference Dye校准的Real Time PCR仪有：
Bio-Rad CFX96/CFX 384/iCycler iQ5/ iQ /My iQ5/MiniOpticon/Opticon/Opticon /Chromo4；Eppendorf MasterCycler realplex/ realplex 2s。Cepheid SmartCycler；Illumina Eco qPCR；R℃he Applied Science LightCycler 480；Thermo Scientific PikoReal Cycler；Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q/Rotor-Gene 3000/ Rotor-Gene 6000；其他仪器。

注意事项：
1、用DEPC处理实验用到的所有器材，或者购买已经证明无核酸酶的实验用具，整个实验过程需戴手套并经常更换手套，避免RNA酶的污染。
2、确保所用试剂中无RNA酶污染。
3、试剂盒如不使用，要严格密封保存。在反转录过程中，所有管盖要确保扣严。
4、纯化过的RNA要保证不含有盐，金属离子，乙醇和*酚，因为以上成分会干扰第一链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀法去除痕量污染物。

储存条件：-20℃
关键词：SYBR,SYBR Two-Step qRT-PCR UltraMix,两步法RT-qPCR试剂盒(SYBR),JN0052


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编号	名称
JN0639	重组人CDSN(Corneodesmosin)
JN1788	重组人INPP5A
JN0811	重组人牙本质基质蛋白1(DMP-1)
JN0095	200bp DNA Ladder
JN0586	重组人Myocilin
JN0718	重组人胰脂肪酶相关蛋白1(PLRP1)
JN1752	重组人PPP1CC(丝*酸/苏*酸蛋白*(代"磷")酸酶1C催化亚基)
JN1170	重组人UBA5
JN0850	重组人GDP-L-岩藻糖合成酶(NADPH结合蛋白)
JN0469	重组人TNFSF10
JN1169	重组人心肌营养素1(Cardiotrophin-1)
JN1961	重组人硫氧化还原蛋白-2(TXN2)(Thioredoxin-2)
JN0874	重组人生长阻滞和DNA损伤诱导45γ(GADD45G)
JN0837	重组人PROC(蛋白酶K依赖性蛋白C)
JN0156	己糖激酶
JN0329	重组人趋化因子CCL5(RANTES)(带His标签)
JN1810	重组人SLAMF1(SLAM)(CD150)(信号淋巴细胞激活分子)
JN1701	重组人Serpin A1(丝*酸蛋白酶抑制剂A1)
JN0304	重组人趋化因子CCL28
JN1195	重组人Neuritin(NRN1)
JN1096	重组人NCR3(天然细胞毒性触发蛋白3)
JN0855	重组人泛素结合酶E2-G2(UBCE2G2)
JN1742	重组人PRCP(溶酶体Pro-X羧肽酶)
JN0731	重组人二肽酶1(DPEP1)
JN0732	重组人碳酸酐酶11(CA11)
JN0079	DNA拓扑异构酶I
JN0163	SUMO蛋白酶
JN1709	重组人激肽释放酶(Kallikrein 10)(KLK10)
JN1624	重组小鼠CTLA-4(CD152)
JN1012	重组人PDCD5(程序性细胞死亡蛋白5)
JN0961	重组人NEDD8(神经发育下调因子8)(神经前体细胞表达发育下调蛋白8)
JN1882	重组人CD200
JN1415	重组小鼠组织蛋白酶H(CTSH)
JN0581	重组人凝血因子III
JN0151	亮*酸脱*酶
JN0272	重组人成纤维生长因子8e
JN1820	重组人ICAM-1(细胞间粘附分子1)