一步法RT-PCR试剂盒特价促销

特别声明：本产品及我公司所售其他产品均为科研类试剂产品，严禁用于药物、医疗及其他非科研用途。

北京百奥莱博专业生产供应一步法RT-PCR试剂盒特价促销，我公司销*(代"售")全品类的分子生物学试剂，价格优惠，欢迎广大科研工作者垂询订购。

名称：一步法RT-PCR试剂盒特价促销
规格：100次
品牌：百奥莱博
英文名：UltraRT One Step RT-PCR Kit
编号：WE0129
产地：国产|进口
  本试剂盒是专为一步法RT-PCR实验研制，逆转录和PCR在同一反应体系中进行，反应过程中无需添加试剂，无需打开管盖，在避免污染的同时提高了检测灵敏度和实验效率。本试剂盒包括全新高效逆转录酶、快速热启动DNA聚合酶，同时包含适用于逆转录和PCR扩增的反应缓冲液和实验中所必需的其它组分。UltraRT逆转录酶RNase H活性缺失，减少了逆转录反应中RNA的降解。该逆转酶逆转录效率高，可对少量RNA模板进行良好的逆转录反应。PCR反应使用的快速热启动DNA聚合酶具有扩增效率高、特异性强、延伸速度快的优良性能。独特的缓冲体系使逆转录酶和聚合酶同时发挥最大功效。使用本试剂盒扩增得到的目的产物3"端附有一个″A″碱基，可直接用于T/A克隆。

试剂盒组成：

 

组份	100次
UltraRT OneStep EnzymeMix	50μl
2×UltraRT OneStep Buffer	1.4ml
RNase-Free Water	1.5ml

注意事项：
1、在操作过程中应避免RNase污染，防止RNA降解或实验中的交叉污染，建议在专门的区域进行RNA操作，使用专门的仪器和耗材，操作人员带口罩和一次性手套并经常更换手套。
2、实验尽量使用一次性塑料器皿，若使用玻璃器皿，应使用0.1%DEPC(焦碳酸二乙酯)水溶液在37℃处理12小时，并在120℃下高压灭菌30分钟后使用，或者将玻璃器皿在180℃下干热灭菌60分钟后使用。实验中用到的无菌水应使用0.1%的DEPC处理后进行高压灭菌。
3、本试剂盒中的所有试剂使用前请上下颠倒轻轻混匀，尽量避免起泡，并经短暂离心后使用。所涉及的酶类使用后应尽快放回-20℃，避免反复冻融。
4、本试剂盒必须使用特异性引物，引物的选择可根据具体实验来选择，引物设计的好坏直接影响到RT-PCR 反应的结果，设计引物时需考虑GC含量，引物长度，引物位置，PCR产物的二级结构等因素，建议采用专业的引物设计软件来设计。

使用方法：
1、将RNA模板、引物、OneStep RT-PCR Buffer、UltraRT OneStep RT-PCR EnzymeMix和RNase-Free Water溶解并置于冰上备用。
2、根据以下表格配制反应体系：
 

试剂	25μl反应体系	终浓度
2×UltraRT OneStep Buffer	12.5μl	1×
Forward Primer，10μM	1μl	0.4μM
Reverse Primer，10μM	1μl	0.4μM
UltraRT OneStep EnzymeMix	0.5μl
RNA Template	Xμl	1 pg–1μg
RNase-Free Water	up to 25μl

注意：引物浓度请以终浓度0.1-1.0μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

3、涡旋震荡混匀，短暂离心，将溶液收集到管底。
4、将热循环仪预热到45℃，将PCR管置于热循环仪中，进行RT-PCR反应。

反应条件：

步骤	温度	时间	循环数
反转录	45℃	30 min
PCR预变性	95℃	2 min
变性	94℃	30 s	30-40 个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	30 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)一般PCR实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，退火时间一般为20-30秒，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
2)延伸时间根据扩增的片段大小设定，本产品中包含的DNA Polymerase扩增效率为1 kb/30s。
3)可根据扩增产物的下游应用设定循环数。循环次数太少，扩增量不足；循环次数多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。

5、反应结束后取5μl反应产物，加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。

储存条件：-20℃，避免反复冻融。

我公司的一步法RT-PCR试剂盒特价促销，性价比高，货期短，送货上门，欢迎您来电咨询购买，另外，我公司还生产供应销*(代"售")下列产品：
维生素B3 L-Cysteine Hydrochloride Anhydrous 59-67-6
D-正缬*酸 Chitodextrinase 2013-12-9
顺-15-二十四碳单烯酸 Fructo-oligosaccharide 506-37-6
石蕊 ATA 1393-92-6
9007-83-4 γ-球蛋白 γ-Globulins from bovine blood
ARB10383 人可溶性CD21(CR2/sCD21)elisa检测说明书 Human soluble cluster of differentiation 21,scd21 ELISA KIT
PY08-074  0.85%生理盐水 9ml  20支/盒  用作稀释液或菌悬液的制备
ARB13829 猪Bcl-2相关X蛋白(BAX)含量分析 Porcine bcl-2 assaciated x protein,bax ELISA KIT
ARB12233 大鼠肌酸激酶(CK)ELISA检测服务 
556-50-3 甘*酸二肽 Glycylgcine
86-87-3 NAA α*乙酸
ARB13449 鸡白介素6(IL-6)代做ELISA实验 Chicken interleukin 6,IL-6 ELISA KIT
ARB13232 小鼠粘蛋白/粘液素7(MUC7)酶联免疫定量检测 Mouse mucin-7,muc7 ELISA KIT
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·游离DNA样本保存管(5ml,PET)
编号：WE0397
英文名称：Cell-Free DNA Storage Tube(PET,5ml)
规格：5ml×5支|5ml×50支
本保存管为PET材质，质量轻，便于运输，管壁破损机率极小，标本在运输、离心及试验过程发生泄漏的可能性极小。
cfDNA样本保存管可直接用于血样的采集与运输，并稳定其中的cfDNA(Cell-Free DNA)。产品中的保存液由EDTA抗凝剂和特殊的保护剂组成，能够有效抑制血浆中的核酸酶，并避免血液有核细胞中基因组DNA的释放。
使用cfDNA样本保存管采集血液样本之后，在6-35℃可稳定保存cfDNA长达14天，为血液样本的运输及储存提供了极大的便利。
cfDNA样本保存管中血液样本可按大多数商业化试剂盒进行cfDNA提取，提取后的cfDNA可应用于下游的检测与分析。同时，该产品也能够用于血液有核细胞中的基因组DNA的保存。


·丽春红染色试剂
编号：WE0305
英文名称：Ponceau Stain Reagent
规格：100ml
  丽春红为常用蛋白质染色剂。试剂本身带负电荷，既可与带正电荷的*基酸残基相结合，也可与蛋白质非极性区结合，从而在印迹膜上形成清晰的红色条带；同时这种结合具有可逆性，染色后可用蒸馏水、PBS缓冲液或其它适当溶液进行漂洗脱色，对后续实验不产生影响。本产品可用于检测Western Blot实验中PVDF或NC膜上蛋白，以检测蛋白的转膜效率；具有灵敏度高，使用方便等优点。

注意事项：
1、丽春红染色试剂不适用于尼龙膜上的蛋白的检测。
2、使用本品时，请穿着实验服并佩戴手套进行操作。
3、本产品仅用于科研，不能用于人体实验或人体治疗。

操作步骤：
1、蛋白转移完毕后，将PVDF或NC膜完全浸没在Ponceau Stain Reagent(丽春红染色液)中，摇动染色3-5分钟。
2、使用纯水、PBS缓冲液或其它适当溶液对印迹膜进行漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除未与蛋白结合的染料，直至膜上出现清晰条带。
3、检测结束后，再次使用纯水，PBS缓冲液或其它适当溶液对印迹膜进行漂洗2-3次，每次3-5分钟，去除与蛋白结合的丽春红染料。
4、按照正常步骤，进行后续的Western Blot检测。

储存条件：室温


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·新型植物基因组DNA提取试剂盒
编号：WE0174
英文名称：NewPurify Plant Genomic DNA Extraction Kit
规格：50次|200次
  本试剂盒采用高效、专一结合核酸的离心吸附柱和独特的缓冲系统，适合从各种不同的植物新鲜或冻存组织中提取基因组DNA，并可最大限度地去除植物组织中的杂质。本试剂盒无需使用酚/*仿抽提，操作安全。提取的基因组DNA片段大、纯度高、质量稳定可靠，适用于PCR、荧光定量PCR、分子标记、文库构建等实验。

试剂盒组成：

组份	50次	200次
Buffer LP1	25ml	100ml
Buffer LP2	10ml	40ml
Buffer LP3(浓缩液)	21ml	84ml
Buffer GW2(浓缩液)	15ml	75ml
Buffer GE	15ml	60ml
RNase A(10 mg/ml)	300μl	1.25ml
吸附柱DM及收集管	50套	200套

自备试剂：无水乙醇

实验前准备及重要注意事项/strong>：
1、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。
2、第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明在Buffer LP3和Buffer GW2中加入无水乙醇。使用前请检查Buffer LP1和Buffer LP2是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀，请将Buffer LP1和Buffer LP2于56℃水浴重新溶解。

操作步骤：
1、取植物新鲜组织100 mg左右或干重组织约20 mg，加入液氮充分研磨。
2、将研磨后的粉末收集到离心管(自备)中，加入400μl Buffer LP1和6μl RNase A(10 mg/ml)，涡旋振荡1分钟，室温放置10分钟，使其充分裂解。
注意：
1)使用涡旋振荡或移液器吹打，充分裂解组织，组织裂解不完全会影响最终的DNA得率。
2)请勿在使用前将Buffer LP1与RNase A混合。
3、加入130μl Buffer LP2，混匀，涡旋震荡1分钟。
4、12000rpm(~～13400×g)离心5分钟，将上清移至新的离心管(自备)中。
5、加入1.5倍体积的Buffer LP3(使用前检查是否已加入无水乙醇)，充分混匀(如500μl滤液加入750μl Buffer LP3)。
注意：加入Buffer LP3后应立即混匀，可能会产生沉淀但不影响后续实验。
6、将上步所得溶液和沉淀全部加入到已装入收集管的吸附柱DM中，若一次不能加完溶液，可分多次转入。12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
7、向吸附柱中加入500μl Buffer GW2(使用前检查是否已加入无水乙醇)，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
注意：如吸附膜呈现绿色，向吸附柱中加入500μl无水乙醇，12000rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
8、重复步骤7.
9、12000rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底晾干。
注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应(酶切、PCR 等)。
10、将吸附柱放到一个新离心管(自备)中，向吸附膜的中间部位悬空滴加50-100μl Buffer GE或灭菌水，室温放置2-5分钟，12000rpm离心1分钟，收集DNA溶液。-20℃保存DNA。
注意：
1)如果下游实验对pH值或EDTA敏感，可以用灭菌水洗脱。洗脱液的pH值对洗脱效率有很大影响，若用水做洗脱液应保证其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH将水的pH值调到此范围)，pH值低于7.0时洗脱效率不高。
2)离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。
3)如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤10所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤10；若洗脱体积小于100μl，可以增加DNA的终浓度，但可能会减少DNA的总产量。如果所得DNA的量小于1μg，推荐用50μl Buffer GE进行洗脱。
4)因为保存在水中的DNA会受到酸性水解作用的影响，如需长期保存，推荐用Buffer GE洗脱并于-20℃保存。

储存条件：室温(15～30℃)。

北京百莱博科技有限公司是核酸扩增(PCR)产品的专业生产供应销*(代"售")商，恭候您的咨询选购一步法RT-PCR试剂盒特价促销。