IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒促销

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IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒促销的品牌：百奥莱博，是优质的基因结构和功能产品，用于科研实验，本产品质量好，且极具价格优势，深为用户称道，了解更多IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒等基因结构和功能产品请联*(代"系")我司咨询订购。

北京百奥莱博科技有限公司专业生产供应IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒促销，产品信息：

类别：基因结构和功能

产品名	产品编号	包装规格
IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒	ZN0707	100T

编号：ZN0707

规格：100T

品牌：百奥莱博

产地：北京

基本信息：

保存条件：4℃保存一年

工作量：100张切片。

有效期：一年。

适用种属：mouse,rat

标记方式：3’—尾段标记

试剂盒中内容：

1.胃蛋白酶(×10; Pepsin)2ml；

2.预杂交液2ml；

3.IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒寡核苷酸探针杂交液2ml；

4.封闭液5ml；

5.生物素化鼠抗Digoxin5ml；

6.SABC-POD 5ml；

7.生物素化过氧化物酶5ml。

用户自备试剂：

原位杂交专用盖玻片；POLY-L-LYSINE；DEPC；20%甘油

缓冲液(3%柠檬酸,2×SSC，0.5×SSC，0.2×SSC,原位杂交用PBS)

一．培养细胞和冰冻切片

准备工作：

固定液：4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)；1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)

3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。

2×SSC——1000ml蒸馏水中加*化*17.6g，柠檬酸三*(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。

0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。

0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。

20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。

原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加*化*30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。

操作程序：

注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。

1．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．细胞在多聚赖*酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。

3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。

6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定10分钟。蒸馏水洗涤3次。

7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。

8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。

9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。

10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗

11.滴加生物素化鼠抗Digoxin：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。

13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。

14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。

15.必要时苏木素复染，充分水洗。

16.酒精脱水，二甲*透明，封片。

二．石蜡切片

如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%多聚甲醛/0.1M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。

1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。

2．玻片的处理：一般采用多聚赖*酸或APES。

3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。

4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3%柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。

结果观察：

IGF-IIR的细胞胞浆着色呈棕黄色。

注意事项：

由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。

IGF-IIR mRNA原位杂交试剂盒促销专业优质供应商：北京百奥莱博科技有限公司

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编号	类别	名称
ZN1017:基因结构和功能	NPPC mRNA原位杂交试剂盒
ZN2324:人ELISA试剂盒	人巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)(CCL20)检测试剂盒	Human Macrophage Inflammatory Protein 3 alpha ELISA Kit
ZN1035:基因结构和功能	OB-Rb mRNA原位杂交试剂盒
ZN1379:基因结构和功能	TGFβR 1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0447:基因结构和功能	EMID2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1352:基因结构和功能	SYT11 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0466:基因结构和功能	EPHB4 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0584:基因结构和功能	GFRA1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1794:重组蛋白	小鼠TNFα重组蛋白
ZN1115:基因结构和功能	PEGFP-C1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN2537:小鼠ELISA试剂盒	小鼠趋化因子CCL25检测试剂盒(ELISA方法)	Mouse Chemokine(C-C motif) ligand 25 ELISA Kit
ZN1361:基因结构和功能	TDT mRNA原位杂交试剂盒
ZN1009:基因结构和功能	NOS2/iNOS mRNA原位杂交试剂盒
ZN0544:基因结构和功能	GABA-BR2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN2215:人ELISA试剂盒	人肝细胞生长因子(HGF)检测试剂盒(ELISA方法)	Human Hepatocyte growth factor ELISA Kit
ZN0446:基因结构和功能	Egr-1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1711:重组蛋白	人sTNFR1重组蛋白
ZN1744:重组蛋白	小鼠CD30L重组蛋白
ZN2233:人ELISA试剂盒	人胰岛素样生长因子结合蛋白6(IGFBP-6)检测试剂盒(ELISA方法)	Human Insulin-like growth factor-binding protein 6 ELISA Kit
ZN1452:基因结构和功能	TWIST2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN0821:基因结构和功能	KLF2 mRNA原位杂交试剂盒
ZN2448:人ELISA试剂盒	人硫氧还蛋白(Thioredoxin)检测试剂盒	Human Thioredoxin ELISA Kit
ZN2704:小鼠ELISA试剂盒	小鼠巨噬细胞炎性蛋白3α(MIP-3α)检测试剂盒	Mouse Macrophage Inflammatory Protein 3 alpha ELISA Kit
ZN2083:人ELISA试剂盒	人DC-SIGN(CD209)ELISA试剂盒	Human CD209 ELISA Kit
ZN0535:基因结构和功能	Fra-1 mRNA原位杂交试剂盒
ZN1861:免疫检测	浓缩型免疫组化试剂盒(SABC-Cy3)(山羊IgG)

 

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